میزان بیان LncRNA-DLEU1 و TRAF4 در بیماران مبتلا به سرطان کلورکتال و تاثیر سرکوب LncRNA-DLEU1 بر بیان ژن TRAF4 و تکثیر سلولی
چکیده
سرطان کولورکتال به عنوان سومین سرطان شایع و عامل مرگ بر اثر سرطان در جهان شناخته می¬شود. هدف از مطالعه حاضر بررسی میزان بیان ژن¬های DLEU1 و TRAF4 در بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال و تاثیر سرکوب DLEU1 بر بیان ژن TRAF4 و تکثیر سلولی بود.
مواد و روش¬ها: در مطالعه حاضر 30 بافت توموری و بافت غیر توموری مجاور از بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال جمع آوری شد. پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از نمونه¬های بافتی، میزان بیان ژن¬های TRAF4 و DLEU1 با استفاده از تکنیک Real-Time PCR بررسی شد. در ادامه سلول¬های سرطانی کولورکتال HT29 کشت داده شده و سپس غلظت¬های مختلف siRNA ضد DLEU1 توسط الکتروپوریشن ترانسفکت شد. سپس تاثیر ترانسفکشن بر روی میزان بیان ژن¬های TRAF4 و DLEU1 و همچنین ژن¬های آپوپتوزی مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت میزان تکثیر و مهاجرت سلول¬های سرطانی کولورکتال ترانسفکت شده به ترتیب با استفاده از روش های MTT و خراش (اسکراچ) مورد بررسی قرار گرفت.
نتایج: میزان بیان ژن¬های DLEU1 و TRAF4 در بافت سرطانی کولورکتال بطور معنی داری نسبت به بافت مجاور غیر سرطانی افزایش پیدا کرد. پس از ترانسفکشن siRNA ضد DLEU1 به سلول¬های سرطانی، بیان ژن DLEU1 بطور معنی‌داری کاهش یافت؛ در ادامه بیان ژن TRAF4 در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده با کاهش معنی دار همراه بود. همچنین میزان بیان ژن¬های القاء کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری افزایش یافت؛ در حالی که میزان بیان ژن مهارکننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری کاهش یافت. بررسی بقاء و مهاجرت سلولی نشان داد که سرکوب بیان ژن DLEU1، بقاء و مهاجرت سلول¬های سرطانی کولورکتال را بطور وابسته به دوز و زمان کاهش می-دهد.