بررسی اثر کاهش بیان ژن SLC16A13 بر آپوپتوز و متاستاز در سل¬لاین¬های سلولی سرطان تیرویید
چکیده
نقش بیان نامتعادل ژنها در سرطانهای تیروئید به ویژه در انواع خانوادگی مدولاری و غیرمدولاری به خوبی شناخته شده است. هدف از انجام این مطالعه بررسی اثر کاهش بیان ژن SlC16A13 بر آپوپتوز و متاستاز بر روی سل لاین TPC 1 سرطان پاپیلاری تیرویید بود.
مواد و روش ها: ابتدا رده های سلولی TPC 1 سرطان تیرویید در محیط کشت RPMI+ 10% FBC کشت داده شد. سپس shRNA سنتتیک ضد ژن SLC16A13 در رده سلولی مورد بررسی ترانسفکت شد. سپس تاثیر این تیمار بر تغییر بیان ژن هدف با تست Real Time PCR مورد تایید قرار گرفت. سپس تاثیر این تیمار بر روند بقا و آپوپتوز بوسیله تست های MTT و فلوسایتومتری بررسی شد. برای بررسی نقش این تیمار بر روی توانایی مهاجرت سلول های سرطانی نیز از تست SCRATCH استفاده شد و تغییرات بیان ژنهای درگیر در آپوپتوز و مهاجرت شامل Casp-3،Casp-8, Casp-9, Bcl2, Bax, E-cadherin و Vimentin بوسیله qRT-PCR بررسی شد.
نتایج: ﻃﺒﻖ ﻧﺘﺎﻳﺞ ﺑﻪ ﺩﺳﺖ ﺁﻣﺪﻩ ﺩﺭ ﺭﺩﻩ ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻣﻮﺭﺩ ﺑﺮﺭﺳﻲ ﻛﺎﻫﺶ ﺑﻴﺎﻥ ﮊﻥ SLC16A13 ﺑﺎﻋﺚ ﺍﻓﺰﺍﻳﺶ ﺩﺭ ﻣﻴﺰﺍﻥ ﺁﭘﻮﭘﺘﻮﺯ ﺩﺭ ﺳﻠﻮﻟﻬﺎ ﺷﺪﻩ ﻭﻟﻲ ﺗﻐﻴﻴﺮﻱ ﺩﺭ ﺗﻮﺍﻧﺎﻳﻲ ﻣﻬﺎﺟﺮﺕ ﺳﻠﻮﻟﻬﺎﻱ ﺳﺮﻃﺎﻧﻲ ﺍﻳﺠﺎﺩ ﻧﻤﻲ ﻛﻨﺪ. همچنین ﺑﺮﺭﺳﻲ ﺑﻴﺎﻥ ﮊﻧﻬﺎﻱ ﺩﺭﮔﻴﺮ ﺩﺭ ﺭﻭﻧﺪ ﺁﭘﻮﭘﺘﻮﺯ و مهاجرت ﻧﺸﺎﻥ ﺩﺍﺩ ﺑﻴﺎﻥ ﮊن هاﻱ Casp-3, Casp-8, Casp-9, Bax, Vimentin ﺍﻓﺰﺍﻳﺶ ﻳﺎﻓﺘﻪ ﺑﻮﺩ ﻛﻪ ﺗﻐﻴﻴﺮﺍﺕ ﺑﻴﺎﻥ Casp-3, Casp-8, Bax ﺍﺯ ﻧﻈﺮ ﺁﻣﺎﺭﻱ ﻣﻌﻨﻲ ﺩﺍﺭ ﺑﻮﺩ. ﺩﻳﮕﺮ ﮊﻥ ﻣﻮﺭﺩ ﺑﺮﺭﺳﻲ ﺩﺭ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﺣﺎﺿﺮ BCL-2 ﺑﻮﺩ که ﺑﺎ ﻛﺎﻫﺶ ﻣﻌﻨﻲ ﺩﺍﺭﻱ ﻫﻤﺮﺍﻩ ﺑﻮﺩ. ﺍﺯ ﻃﺮﻓﻲ ﺩﺭ ﺍﻳﻦ ﺑﺮﺭﺳﻲ ﻣﻴﺰﺍﻥ ﺑﻴﺎﻥ ﮊﻥ E-Cadherin ﻧﻴﺰ ﻣﻮﺭﺩ ﺁﻧﺎﻟﻴﺰ ﻗﺮﺍﺭ ﮔﺮﻓﺖ که ﺗﻐﻴﻴﺮﺍﺕ ﺍﻳﻦ ﮊﻥ ﺍﺯ ﻧﻈﺮ ﺁﻣﺎﺭﻱ ﺩﺭ ﺑﺎﺯﻩ ﻣﻌﻨﻲ ﺩﺍﺭﻱ ﻗﺮﺍﺭ ﻧﺪﺍﺷﺖ.