جداسازی و مشخصه یابی و بررسی سمیت سلولی اگزوزوم های ترشح شده از سلول های تیمار شده با دوکسوروبیسین
چکیده
اگزوزوم‌ها دارای مزایای متعددی از جمله غیرسمی و غیرایمنی زایی بوده و قابلیت طراحی شدن برای تعیین هدف خاص و تحویل دارو دارند. که سبب می‌شود تا آنها به عنوان یک نانوساختار قدرتمند برای داروهای ضد سرطان با هدف درمان سرطان مورد استفاده قرار گیرند. هدف:
این رساله جدا سازی و مشخصه یابی و بررسی سمیت سلولی اگزوزوم های ترشح شده از سلول های تیمار شده با دوکسوروبیسین می‌باشد.
مواد و روش‌ها:
در این مطالعه اگزوزوم های ترشح شده از سلول های تیمارشده با دوکسوروبیسین طبق دستورالعمل کیت تجاری موجود در بازاراز محیط کشت استخراج شده و از نظر خصوصیات ظاهری و اندازه ذرات توسطDLS ,TEM,SEM مورد بررسی قرار گرفت و نشانگر ویژه اگزوزومی توسط وسترن بلات انجام شده و سنجش پروتیین‌ها به روش BCA انجام شد و سپس سمیت سلولی توسطMTT بررسی شده و میزان برداشت سلولی دارو در رده های سلولی نیز بررسی شده است.
نتایج:
متوسط سایز اگزوزم‌ها بدست آمده توسط DLS، 100-120 نانومتر بود. متوسط سایز اگزوزم‌ها محاسبه شده توسط میکروسکوپ SEM برابر 82-104 نانومتر است. آنالیز وسترن بلات نیز بیان (CD81,CD63)نشانگر ویژه اگزوزومی در اگزوزوم های تخلیص شده را نشان داد. در روش BCAنیز میانگین محتوا پروتئینی اگزوزوم‌ها ug/ml2269.035 محاسبه شد.سمیت به روش MTT در غلظتهای مختلف بررسی شد که با افزایش غلظت دارو اثرات سمی نیز افزایش می یابد ولی در اگزوزوم‌های ترشح شده از سلول‌های تریت نشده و تریت شده با دارو دوکسوروبیسین باعث افزایش مرگ سلولی به صورت بارز نشده است و در بررسی میزان برداشت سلولی مشاهده شد که هردو قادر به نفوذ به داخل سلول می‌باشد.
بحث و نتیجه گیری:
اگزوزوم استخراج شده از محیط حاوی دوکسوروبیسین بر روی سلول‌های تومور باعث افزایش مرگ سلولی نشدند.