بررسی بیان ژن gtfB و ارتباط آن با تغییرات پروفایل پروتئومیکس استرپتوکوکوس موتانس در فرم بیوفیلم و پلانکتونی پس از رشد در حضور ساکارز و نشاسته
Abstract
استرپتوکوکوس موتانس یک کوکوس گرم مثبت می¬باشد که از عوامل اصلی عفونت دندان از جمله پوسیدگی دندان و پریودنتیت است. این باکتری با تولید بیوفیلم و با تغییر محتوای پروتئوم، باعث خود محافظتی شده و درمان بیماری¬ها را دشوار می¬کند. بنابراین، هدف از این مطالعه تعیین اثرکربوهیدرات-های ساکارز و نشاسته بر روی بیان ژن gtfB و ارتباط آن با تغییرات پروفایل پروتئومیکس استرپتوکوکوس موتانس در فرم بیوفیلم و پلانکتونی می¬باشد.
روش کار: در این مطالعه، استرپتوکوکوس موتانس ATCC 35668 را در سه محیط جداگانه لوریا¬برتانی دارای ساکارز، نشاسته و ترکیبی از ساکارز و نشاسته و یک محیط فاقد¬کربوهیدرات در 37 درجه به مدت 48-24 ساعت کشت داده شد. از محیط کشت برای بررسی تشکیل بیوفیلم با استفاده از روش پلیت میکروتیتر 96 خانه¬ای، و بیان ژن gtfB با استفاده از Real time PCR SYBR Green بررسی شد. بعلاوه، تغییرات پپتید¬¬های باکتری بعد از مواجه با کربوهیدرات¬های ساکارز و نشاسته با استفاده از روش طیف سنجی جرمی تکنیک جذب و یونش لیزری با ماتریکس (MALDI-TOF MS) انجام گردید.
یافته¬ها: در این مطالعه کربوهیدرات¬ها به طور قابل توجهی تشکیل بیوفیلم را افزایش دادند. ساکارز سبب افزایش فراوانی آنزیم¬های گلوتامیناز (Glutaminase)، آدنیلات کیناز (Adenylate kinase) و 50S ribosomal protein L29 گردید و بیان Lactate utilization protein C، 5-hydroxybenzimidazole synthase BzaA و 50S ribosomal protein L16 تحت تاثیر نشاسته افزایش یافت، علاوه بر این ترکیب ساکارز و نشاسته موجب افزایش فراوانی Ribosome-recycling factor، Peptide chain release factor 1 و Peptide methionine sulfoxide reductase MsrB شد. کربوهیدرات¬های ساکارز، نشاسته و ترکیب ساکارز و نشاسته همچنین با تاثیر بر ژن gtfB موثر در کلونیزاسیون باعث افزایش چشمگیر میزان بیان آن گردید.