مطالعه اثر بخشی مهار بیان CTLA4 بر رشد و تکثیر در رده ی سلولی HN-5

Abstract

امروزه در درمان سرطان اسکواموس سل کارسینوم، مهار ایمیون‌چک‌پوینت‌ها بسیار مورد توجه قرارگرفته است. CTLA-4 مولکول مهاری تنظیم‌کننده‌ی سیستم ایمنی است که با بیان در سطح سلول‌های سرطانی، در کاهش عملکرد سلول‌های ایمنی نقش دارد. در این مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصی، بیان ژنCTLA-4 سرکوب شده و تأثیر این سرکوب هم‌زمان بر رشد، مهاجرت و آپوپتوز سلول‌های سرطانی ارزیابی گردد. مواد و روش‌ها بدین منظور رده سلولی اسکواموس سل کارسینوم دهانی از نظر بیان CTLA-4 بررسی شده و سپس از طریق siRNA اختصاصی ژن CTLA-4 با روش الکتروپوریشن به رده‌ی سلولی مناسب انتقال یافت و با تست MTT اثر سایتوتوکسیک این سرکوب بررسی گشت. با ارزیابی فلوسایتومتری میزان آپوپتوز و تغییرات چرخه سلولی بررسی شد. مهاجرت رده‌ی سلولی با تست wound healing assayبررسی گردید و ژن‌های دخیل در القای آپوپتوز و مهاجرت سلولی نیز مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به دنبال سرکوب بیان ژن CTLA-4 میزان تکثیر سلول‌های سرطانی کاهش یافت. از طرفی میزان آپوپتوز سلول‌های ترانسفکت شده نیز القا شد. از طرفی این سرکوب منجر به کاهش توانایی مهاجرت و توقف چرخه‌ی سلولی در فاز G1 گردید. میزان بیان ژن BAX افزایش، ژن BCL-2 کاهش، Cas9 افزایش و ژن C-Myc کاهش داشت.