تهیه و ارزیابی لیپوزوم های وین کریستین اصلاح شده با پپتید به منظور افزایش قابلیت نفوذ دارو از سد خونی-مغزی
چکیده
سابقه و زمینه: در سالهای اخیر فرمولاسیونهای لیپوزومی اصلاح شده با پپتید، به عنوان سیستم-
های دارورسانی هدفمند به گلیومای مغزی بسیار مورد توجه قرار گرفته اند.
هدف: فرمولاسیونهای وینکریستین لیپوزومی اصلاح شده با سه پپتید هدفمند برای گیرنده
ترانسفرین شامل 21 T 6 ، B و 7 T تهیه و قابلیت عبور از BBB و تجمع گلیومای انتخابی آنها در شرایط
برون تن 2 و درون تن 1 ، ارزیابی و مقایسه شدند.
روش کار: در مرحله اول، لینکر حاوی گروه عاملی مالئیمید ) Brij 66-Mal ) با استفاده از Brij 66
که سورفکتانتی غیریونی حاوی پلی اتیلن گلیکول است، طی 6 مرحله سنتز شد. برای تایید سنتز Brij
66-Mal ، آنالیز طیف سنجی مادون قرمز ) FT-IR ( در هر مرحله از سنتز و آنالیز عنصری ) CHNS ( و
طیف سنجی رزونانس مغناطیسی هسته ای پروتون و کربن )C NMR 21 و H NMR 2 ( بر روی محصول
نهایی انجام شدند . در مرحله بعد، سه پپتید T ، 21 B6 و T7 به روش سنتز فاز جامد روی رزین رینک-
آمید سنتز شدند و به لینکر Mal- 66 Brij متصل شدند و برای تایید اتصال، آنالیز NMR H 2 روی سه
کونژوگه پپتید-لینکر انجام شد. از روش لایه نازک برای تهیه فرمولاسیونهای لیپوزومی و روش
pre-insertion برای اصلاح سطح لیپوزومها با پپتیدهای T ، 21 B6 و T7 استفاده شد. سپس وین-
کریستین به روش فعال با استفاده از گرادیان pH در لیپوزومها بارگذاری شد. قطر هیدرودینامیکی،
شاخص پلی دیسپرسیتی و پتانسیل زتای فرمولاسیونهای لیپوزومی حاصل، توسط روش پراکندگی
1 In vitro
2 In vivo
دینامیکی ) DLS ( اندازه گیری شد و شکل و موفولوژی آنها توسط دستگاه میکروسکوپ الکترونی
گذاره بررسی شد. برای مطالعه پایداری فرمولاسیونهای لیپوزومی، میزان اندازه ذره ای و شاخص
پلی دیسپرسیتی آنها در مدت 2 ماه و در دمای نگهداری 4 درجه سانتیگراد توسط DLS بررسی شد.
از روش کیسه دیالیز برای مطالعه میزان رهش داروی وینکریستین آزاد و فرمولاسیونهای حاوی
وینکریستین به صورت برون تن در pH 7/4 و دمای 17 درجه سانتیگراد در حضور % 21 سرم جنین
گاوی (FBS) استفاده شد. برداشت سلولی در برون تن به دو روش میکروسکوپ فلورسنت و
فلوسایتومتری روی سلولهای GL162 و hCMEC/D1 به ترتیب به عنوان رده سلولی گلیوما و
اندوتلیال مغزی بررسی شد. میزان نفوذپذیری فرمولاسیونها در برون تن ، توسط سلولهای
hCMEC/D1 کشت داده شده در اینسرتهای ترنسول به عنوان مدل BBB بررسی شد. در مرحله
آخر مطالعات سلولی، سمیت سلولی و میزان آپاپتوز برون تن فرمولاسیونها، روی رده سلولی
GL162 به ترتیب با روش MTT و کیت Annexin V-FITC / PI مورد ارزیابی قرار گرفتند. در پایان،
جهت مطالعه و بررسی توزیع زیستی و هدف گیری مغزی، تصویربرداری حیوانی تمام-بدن 1 درون
تن 4 ساعت و 14 ساعت بعد از تزریق فرمولاسیونها به موش انجام شده و بعد از 14 ساعت اندام-
های حیاتی حیوان شامل مغز، کلیه ها، کبد، قلب، ریه و طحال خارج شده و تحت تصویربرداری
برون جانداری 4 قرار گرفتند.
3 Whole body imaging
4 Ex vivo
نتیجه گیری: لینکر حاوی گروه عاملی مالئیمید ) Brij 66-Mal ( برای اولین بار از Brij 66 سنتز شد
و سه پپتید هدفمند برای گیرنده ترانسفرین، شامل T ، 7 B6 و T21 با موفقیت سنتز شده و به لینکر Brij
66-Mal کونژوگه شدند. فرمولاسیونهای لیپوزومی اصلاح شده با پپتیدهای هدفمند، بارگذاری شده
با وینکریستین، خصوصیات فیزیکوشیمیایی مطلوب، الگوی رهش آهسته، جذب سلولی و سمیت
قابل قبولی در مقایسه با لیپوزومهای اصلاح نشده نشان دادند. در میان تمام فرمولاسیونهای
لیپوزومی اصلاح شده با پپتیدهای هدفمند برای گیرنده ترانسفرین و لیپوزومهای اصلاح نشده،
بیشترین میزان نفوذ از BBB در برون تن و درون تن و توزیع مغز در درون تن را لیپوزومهای اصلاح
شده با پپتید T7 نشان دادند . در نتیجه، میتوان ادعا کرد که فرمولاسیون لیپوزومی وینکریستین
اصلاح شده با پپتید T7 میتواند به عنوان یک ابزار امیدوارکننده برای هدفگیری موثر مغز ویا
درمان گلیوما عمل کند .