تهیه و ارزیابی لیپوزوم های وین کریستین اصلاح شده با پپتید به منظور افزایش قابلیت نفوذ دارو از سد خونی-مغزی

Abstract

سابقه و زمینه: در سالهای اخیر فرمولاسیونهای لیپوزومی اصلاح شده با پپتید، به عنوان سیستم- های دارورسانی هدفمند به گلیومای مغزی بسیار مورد توجه قرار گرفته اند. هدف: فرمولاسیونهای وینکریستین لیپوزومی اصلاح شده با سه پپتید هدفمند برای گیرنده ترانسفرین شامل 21 T 6 ، B و 7 T تهیه و قابلیت عبور از BBB و تجمع گلیومای انتخابی آنها در شرایط برون تن 2 و درون تن 1 ، ارزیابی و مقایسه شدند. روش کار: در مرحله اول، لینکر حاوی گروه عاملی مالئیمید ) Brij 66-Mal ) با استفاده از Brij 66 که سورفکتانتی غیریونی حاوی پلی اتیلن گلیکول است، طی 6 مرحله سنتز شد. برای تایید سنتز Brij 66-Mal ، آنالیز طیف سنجی مادون قرمز ) FT-IR ( در هر مرحله از سنتز و آنالیز عنصری ) CHNS ( و طیف سنجی رزونانس مغناطیسی هسته ای پروتون و کربن )C NMR 21 و H NMR 2 ( بر روی محصول نهایی انجام شدند . در مرحله بعد، سه پپتید T ، 21 B6 و T7 به روش سنتز فاز جامد روی رزین رینک- آمید سنتز شدند و به لینکر Mal- 66 Brij متصل شدند و برای تایید اتصال، آنالیز NMR H 2 روی سه کونژوگه پپتید-لینکر انجام شد. از روش لایه نازک برای تهیه فرمولاسیونهای لیپوزومی و روش pre-insertion برای اصلاح سطح لیپوزومها با پپتیدهای T ، 21 B6 و T7 استفاده شد. سپس وین- کریستین به روش فعال با استفاده از گرادیان pH در لیپوزومها بارگذاری شد. قطر هیدرودینامیکی، شاخص پلی دیسپرسیتی و پتانسیل زتای فرمولاسیونهای لیپوزومی حاصل، توسط روش پراکندگی 1 In vitro 2 In vivo دینامیکی ) DLS ( اندازه گیری شد و شکل و موفولوژی آنها توسط دستگاه میکروسکوپ الکترونی گذاره بررسی شد. برای مطالعه پایداری فرمولاسیونهای لیپوزومی، میزان اندازه ذره ای و شاخص پلی دیسپرسیتی آنها در مدت 2 ماه و در دمای نگهداری 4 درجه سانتیگراد توسط DLS بررسی شد. از روش کیسه دیالیز برای مطالعه میزان رهش داروی وینکریستین آزاد و فرمولاسیونهای حاوی وینکریستین به صورت برون تن در pH 7/4 و دمای 17 درجه سانتیگراد در حضور % 21 سرم جنین گاوی (FBS) استفاده شد. برداشت سلولی در برون تن به دو روش میکروسکوپ فلورسنت و فلوسایتومتری روی سلولهای GL162 و hCMEC/D1 به ترتیب به عنوان رده سلولی گلیوما و اندوتلیال مغزی بررسی شد. میزان نفوذپذیری فرمولاسیونها در برون تن ، توسط سلولهای hCMEC/D1 کشت داده شده در اینسرتهای ترنسول به عنوان مدل BBB بررسی شد. در مرحله آخر مطالعات سلولی، سمیت سلولی و میزان آپاپتوز برون تن فرمولاسیونها، روی رده سلولی GL162 به ترتیب با روش MTT و کیت Annexin V-FITC / PI مورد ارزیابی قرار گرفتند. در پایان، جهت مطالعه و بررسی توزیع زیستی و هدف گیری مغزی، تصویربرداری حیوانی تمام-بدن 1 درون تن 4 ساعت و 14 ساعت بعد از تزریق فرمولاسیونها به موش انجام شده و بعد از 14 ساعت اندام- های حیاتی حیوان شامل مغز، کلیه ها، کبد، قلب، ریه و طحال خارج شده و تحت تصویربرداری برون جانداری 4 قرار گرفتند. 3 Whole body imaging 4 Ex vivo نتیجه گیری: لینکر حاوی گروه عاملی مالئیمید ) Brij 66-Mal ( برای اولین بار از Brij 66 سنتز شد و سه پپتید هدفمند برای گیرنده ترانسفرین، شامل T ، 7 B6 و T21 با موفقیت سنتز شده و به لینکر Brij 66-Mal کونژوگه شدند. فرمولاسیونهای لیپوزومی اصلاح شده با پپتیدهای هدفمند، بارگذاری شده با وینکریستین، خصوصیات فیزیکوشیمیایی مطلوب، الگوی رهش آهسته، جذب سلولی و سمیت قابل قبولی در مقایسه با لیپوزومهای اصلاح نشده نشان دادند. در میان تمام فرمولاسیونهای لیپوزومی اصلاح شده با پپتیدهای هدفمند برای گیرنده ترانسفرین و لیپوزومهای اصلاح نشده، بیشترین میزان نفوذ از BBB در برون تن و درون تن و توزیع مغز در درون تن را لیپوزومهای اصلاح شده با پپتید T7 نشان دادند . در نتیجه، میتوان ادعا کرد که فرمولاسیون لیپوزومی وینکریستین اصلاح شده با پپتید T7 میتواند به عنوان یک ابزار امیدوارکننده برای هدفگیری موثر مغز ویا درمان گلیوما عمل کند .