مطالعه اثر هیپوکسی بر عملکرد های تکثیری و مهاجرتی اگزوزوم های مشتق ازرده سلولی متاستاتیک سرطان سینه بر سلول های HUVEC
چکیده
هدف از این مطالعه تعیین اثر هیپوکسی بر تغییر محتوی اگزوزوم ها ی مترشحه از سلول های سرطانی سینه رده سلولی MDA-MB-231 و BT-474 و تعیین اثری که این اگزوزوم ها بر عملکرد سلول های اندوتلیالی HUVEC از نظر تکثیر , مهاجرت و بیان ژن های مرتبط با مهاجرت و تکثیر مثل ملکول های TGF-β و HIF-1αو بیان miRNA های 16و 433 دارند. مهاجرت و تکثیر مثل ملکول های TGF-β و HIF-1αو بیان miRNA های 16و 433 دارند. مواد و روش ها: رده سلولی MDA-MB-231 و BT-474 در محیط کشت کامل تحت شرایط هیپوکسی و بدون هیپوکسی کشت داده شدند و بعد از 24 ساعت مایع رویی آنها جهت استخراج اگزوزوم جمع اوری شد و اگزوزوم موجود در مایع رویی توسط اولترا سانتریفیوژاستخراج شد. استخراج اگزوزوم توسط عکسبرداری میکروسکوپ الکترونی تایید شد. سلول های HUVEC بعنوان مدل سلولی اندوتلیوم نیز کشت داده شدندو برای انجام تستMTT در پلیت های 96 خانه ای سید شدند و تحت اثر غلظت های متفاوت از اگزوزومهای استخراج شده قرار گرفتند و تاثیر غلظت های مختلف اگزوزوم ها بر تکثیر سلول های HUVEC سنجیده شد سپس برای انجام تست scratch سلول های HUVECدر پلیت های 24 خانه ای سید شدند و تاثیر اگزوزوم های سلول های MDA-MB-231 وBT-474 برمهاجرت این سلول ها سنجیده شد سپسRNA سلول های HUVEC تحت تاثیر اگزوزوم, استخراج شده و cDNAسنتز شد و بیان mRNA و miRNA های کنترل کننده بیان ژنهای مرتبط با مهاجرت و تکثیر مثل ژنهاVEGFR ,HIF-1α و همینطور miR-16 و miR-433 از طریق آزمون qRT-PCRسنجیده شد