مطالعه اثر اگزوزوم های مشتق از سلولهای سرطان سینه بر شاخص های مولکولی گذار اندوتلیال-مزانشیمی (EndMT) در مدل سلولی سلولهای اندوتلیال HUVEC
چکیده
بدست آوردن خصوصیات سرطانی در سلول های نرمال یکی از اولیه ترین نشانه های ایجاد سرطان است. تومورها توانایی القای بیان مولکولهای مرتبط با از دست دادن ویژگی های اندوتلیالی و کسب مارکرهای مزانشیمی را دارند. اگزوزوم های مترشحه از سلولهای سرطانی در ایجاد این حالت دخالت دارند.
هدف: در این مطالعه میزان بیان مولکولهای مزبور در سلول های نرمال تحت شرایط نورموکسی و هایپوکسی مورد سنجش قرار گرفتند.
مواد و روش کار: رده سلولی MDA-MB-231 و BT-474 پس از اینکه به تراکم بالای 80% رسیدند تحت شرایط های نورمورکسی و هایپوکسی بمدت 24 ساعت تیمار شدند. شرایط هایپوکسی بااستفاده از 25 μM Cocl2 اعمال شد. سپس اگزوزوم های مترشحه از رده سلولی با استفاده از اولتراسانتریفیوژ جداسازی و توسط میکروسکوپ الکترونی transmission و ایمونوبلاتینگ علیه مارکرهای CD9, CD63 و CD81 تایید هویت شدند. پس از استخراج RNA سلولی و درنهایت سنتز cDNA بررسی میزان بیان ژن های مرتبط با گذر اندوتلیال-مزانشیمی, توسط quantitative Real-time PCR بررسی شدند.