کنترل متابولیسم و رشد سلولهای بنیادی سرطانی کولورکتال با نانوذرات ایمونولیپوزومی بارگذاری شده با آگونیست/آنتاگونیست گیرندهLXR
چکیده
پیامرسانی LXR متابولیسم و رشد سلولهای سرطانی کولورکتال تنظیم میکند. استفاده از ایمونولیپوزوم (ILipo) حاوی آگونیست/آنتاگونیست LXR میتواند یک استراتژی مناسب برای مهار رشد و تومورزایی CSCs باشد که در این مطالعه به آن پرداخته شده است.
روشها: سلولهایCD133+HT-29 به روش MACS جداسازی و میزان خلوص توسط فلوسایتومتری ارزیابی شد. سمیت سلولی توسط MTT پس از تیمار با T0901317 و SR9243 بررسی شد. میزان کلونیزایی و تکثیر سلولها به ترتیب توسط کشت سه بعدی و سنجش Ki-67 با استفاده از روش ایمنوفلورسنس اندازهگیری و اثر مدولاسیون LXR بر بیان و تولید ناقلهای ABC و آنزیمهای متابولیکی با RT-PCR و وسترن بلات بررسی شد. مهاجرت CSCs تحت تیمار با T0901317 توسط ایجاد خراش و Transwell بررسی گردید. میزان مقاومت سلولی به شرایط هیپواسمزی بعد از تیمار با T0901317 اندازهگیری شد. محتوای ROS داخل سلولی توسط رنگ آمیزی DCFH-DA و تصویربرداری ایمونوفلورسنس مورد مطالعه قرار گرفت و آپوپتوز سلولی توسط سنجش Annexin-V ارزیابی شد. در ادامه آزمایشات، ILipo حاوی SR9243 به روش تشکیل لایه نازک تهیه و توسط DLS و TEM مشخصهیابی و سپس میزان اتصال و برداشت سلولی ILipoتوسط میکروسکوپ فلورسنس آنالیز و اثرات زیستی این سامانه روی CD133+CSCs ارزیابی شد.
یافتهها. CD133+HT-29 با فنوتیپ شبهCSCs با نهایت خلوص جداسازی شدند. T0901317 و SR9243 باعث کاهش زنده مانی سلولی به روش وابسته به دوز شدند. T0901317 میزان بیان ژنی و پروتئینی انتقال دهندههای ABC را افزایش و میزان تکثیر، کلونیزایی و مهاجرت CD133+CSCs را کاهش و آپوپتوز سلولی را القاء کرد. SR9243 از طریق مهار LXR و آنزیمهای متابولیکی، تکثیر و کلونیزایی را کاهش و سطح ROS داخل سلولی افزایش و باعث ایجاد القاء آپوپتوز در CSCs شد. ILipo با اندازه 64.79 نانومتر، میتواند SR را در نسبت حداکثر کپسوله کند. در مقایسه با داروی آزاد و لیپوزومهای غیر هدفمند (Lipo-SR)، ILipo-SR با هدف قرار دادن CD133، اتصال و برداشت نانوذرات را در CD133+CSCs تسهیل و در نتیجه باعث مهار تومورزایی این سلولها، تولید ROS و القاء آپوپتوز شد.
نتیجهگیری: هدفگیری انتخابی دوگانه CD133 و LXR توسط ILipo-SR یک استراتژی امیدوار کننده برای مهار بنیادینگی، متابولیسم و تومورزایی CD133+CSCs میباشد.