بررسی سمیت سلولی و ژنتیکی افزودنی غذایی لاکتات کلسیم (CL) در رده سلولی HUVEC

Abstract

چکیده مقدمه و هدف: سالانه میلیون ها نفر از مردم سراسر جهان در اثر بیماري هاي ناشی از غذا و آب جان خود را از دست می دهند. افزایش شیوع بیماري هاي ناشی از غذا، نشانگر گسترش مشکلات بهداشت عمومی، در کشور هاي توسعه یافته و در حال توسعه می باشد که علاوه بر تهدید سلامتی مصرف کننده، می تواند در اقتصاد کشورها دخیل باشد. کاربرد ترکیبات شیمیایی و حضور میکروارگانیسم ها در مواد غذایی می تواند نقش مهمی در ایجاد بیماری های ناشی از غذا داشته باشد. یکی از شایعترین بیماری های مرتبط با کاربرد ترکیبات شیمیایی، سرطان ها هستند که رتبه دوم مرگ و میر را در کشورهای توسعه یافته و رتبه سوم را درکشورهای در حال توسعه به خود اختصاص داده اند. اخیراً ترکیبات شیمیایی (افزودنی های غذایی) به عنوان یکی از عوامل تأثیرگذار در ایجاد این بیماری ها معرفی شده اند. بر این اساس، این مطالعه با هدف بررسی سمیت سلولی و ژنتیکی افزودنی غذایی لاکتات کلسیم در رده سلولی HUVEC و همچنین تعیین برهمکنش لاکتات کلسیم با آلبومین سرم طراحی گردید. ﻣﻮاد و روش ﻫﺎ: ﺳﻤﯿﺖ ﺳﻠﻮﻟﯽ لاکتات کلسیم در رده ﺳﻠﻮﻟﯽ HUVEC با روش MTT، و ﺳﻤﯿﺖ ژنتیکی با ارزیابی آپوپتوزیس، نکروزیس، شکستگی DNA و کروماتین با استفاده از فلوسایتومتری،assay DNA ladder وDAPI Staining مورد بررسی قرار گرفت. ﺑﺮﻫﻤﮑﻨﺶ لاکتات کلسیم ﺑﺎ آﻟﺒﻮﻣﯿﻦ ﺳﺮم با ﺗﮑﻨﯿﮏ ﻫﺎي اﺳﭙﮑﺘﺮوﻓﺘﻮﻣﺘﺮي و اﺳﭙﮑﺘﺮوﻓﻠﻮرﯾﻤﺘﺮي ارزیابی شد. ﯾﺎﻓﺘﻪﻫﺎ: افزودنی غذایی لاکتات کلسیم باعث مهار رشد سلول های HUVEC در رابطه وابسته به غلظت و زمان شدند. غلظت مهاری (IC50) لاکتات کلسیم در مدت زمان 24 و 48 ساعت به ترتیب برابر با 4 و 3 میلی مولار می باشد. نتایج این تست نشان داد که لاکتات کلسیم اثر معنی داری بر رشد سلول هایHUVEC دارد (P<0.05). رخداد مرحله آپوپتوزیس سلولی در سلول های تیمار شده با لاکتات کلسیم و رنگ آمیزی شده با Annexin-V با استفاده از دستگاه فلوسایتومتری نشان داد که افزودنی فوق الذکر در غلظت IC-50 مشخص شده قادر به القا آپوپتوز و نکروز سلولی قابل توجهی نمی باشد. بر اساس نتایج تکنیک های ladder DNA و رنگ آمیزی باDAPI بعد از 48 ساعت در سلول های تیمار شده با لاکتات کلسیم شکستگی DNA و کروماتین مشاهده نگردید. ﻧﺘﺎﯾﺞ ﺣﺎﺻﻞ از اسپکتوفتومتری برای بررسی برهمکنش بین لاکتات کلسیم و آلبومین سرم گاوی ﻧﺸﺎن داد ﮐﻪ ﺑﺎ اﻓﺰاﯾﺶ ﻏﻠﻈﺖ لاکتات کلسیم از 10 تا 70 میکرومولار در ﺣﻀﻮر ﻏﻠﻈﺖ ﺛﺎﺑﺖ آﻟﺒﻮﻣﯿﻦ سرم گاوی (1 میلی مولار)، ﻣﯿﺰان ﺟﺬب آلبومین افزایش یافت که نشان دهنده برهمکنش بین این دو می باشد. همچنین مطالعات بررسی فلوروسنس ذاتی نشان داد که ﺷﺪت ﻓﻠﻮرﺳﻨﺲ آﻟﺒﻮﻣﯿﻦ در حضور لاکتات کلسیم ﮐﺎﻫﺶ ﯾﺎﻓﺖ ﮐﻪ ﺑﯿﺎﻧﮕﺮ ایجاد کمپلکس لاکتات کلسیم ﺑﺎ آﻟﺒﻮﻣﯿﻦ سرم گاوی می باشد. نتیجهﮔﯿﺮي: لاکتات کلسیم وابسته به دوز و زمان بر رشد سلول هایHUVEC موثر بوده ولی بر روی آپوپتوز و نکروز سلولی، شکستگی DNAو کروماتین این سلول ها تاثیری نداشت. همچنین بین لاکتات کلسیم و آلبومین سرم گاوی برهمکنش وجود داشت. واژﮔﺎن ﮐﻠﯿﺪي: لاکتات کلسیم، ﺳﻠﻮل ﻫﺎي اﻧﺪوﺗﻠﯿﺎل ﺑﻨﺪ ناف اﻧﺴﺎن، ﺳﻤﯿﺖ ﺳﻠﻮﻟﯽ، ﺳﻤﯿﺖ ژﻧﺘﯿﮑﯽ، برهمکنش، آلبومین سرم گاوی