| dc.contributor.advisor | ممویی, مرتضی | |
| dc.contributor.advisor | رحمتی, محمد | |
| dc.contributor.author | کریمی بابااحمدی, محمد | |
| dc.date.accessioned | 2021-05-23T06:35:27Z | |
| dc.date.available | 2021-05-23T06:35:27Z | |
| dc.date.issued | 1399 | en_US |
| dc.identifier.uri | http://dspace.tbzmed.ac.ir:8080/xmlui/handle/123456789/64191 | |
| dc.description.abstract | آنزیم PCSK9 نقش مهمی در افزایش میزان C-LDL از طریق اتصال و تجزیه گیرندهLDL به
عهده دارد. مهار این آنزیم توسط آنتیباديهاي منوکلونال یکی اهداف مهم در جهت پیشگیري از انسداد
عروق قلبی ناشی از افزایش C-LDL است. فاژ دیسپلی یکی از روشهاي سریع و موثر جهت شناسایی
آنتیبادي اختصاصی علیه پروتئین هدف میباشد. هدف این پژوهش جداسازي آنتیبادي اختصاصی علیه
آنزیم PCSK9 با استفاده از تکنیک فاژدیسپلی است.
روشها: آنتیژن PCSK9 توسط روش بر پایه برآیند اتصالی-اختصاصی تگهاي SpyCatcher/SpyTag
Immobilize شد. ابتدا پروتئین SpyCatcher توسط روش خالص سازي غیر ستونی RTX آماده و در
چاهکها کوت گردید. در مرحله بعد، لایزیت باکتري حاوي پروتئین نوترکیب حاوي تگ SpyT به چاهک
ها اضافه شده و به SpyCatcher متصل شد. در ادامه کتابخانه سنتتیک نانوبادي مورد استفاده قرار گرفت. با
استفاده از روشهاي پلیکلونال و منوکلونال فاژ الایزا ، کلونی که بیشترین جذب را نشان داد شناسایی و
پس از تعیین توالی جهت بیان و اندازه گیري Affinity انتخاب شد. پس از بیان و خالص سازي آنتیبادي
توسط ستون کروماتوگرافی NTA-Ni و روش غیر ستونی بر مبناي intein split Npu-ELP از لکه گذاري
نقطه اي و الایزا جهت ارزیابی اختصاصیت و افینیتی آنتیبادي استفاده شد.
نتایج: با استفاده از سیستم SpyCatcher/SpyTag ،هزینه، زمان ومراحل آماده سازي آنتیژن به صورت
چشمگیري کاهش مییابد. با استفاده از کتابخانه سنتتیک، آنتیبادي اختصاصی علیه آنزیم PCSK9
جداسازي و با استفاده از روش غیر ستونی ELP ،آنتیبادي خالص شده با خلوص 90 درصد به دست آمد
که مناسب تحقیقات آزمایشگاهی میباشد.
نتیجه گیري: در این مطالعه با بهینه سازي فرآیند آماده سازي سریع آنتیژن و ساخت کتابخانه و دستورزي
کتابخانه و در ادامه استفاده از روش غیر ستونی خالص سازي، یک سیستم مقرون به صرفه و نسبتا سریع
انتخاب آنتیبادي ساخته شد که از آن جهت انتخاب علیه آنزیم PCSK9 استفاده گردید. | en_US |
| dc.language.iso | fa | en_US |
| dc.publisher | دانشگاه علوم پزشکی تبریز، دانشکده علوم نوین پزشکی | en_US |
| dc.subject | منوکلونال آنتیبادي، فاژدیسپلی، نانوبادي، PCSK9 ،S | en_US |
| dc.title | غربال کتابخانه فاژي آنتی بادي جهت جداسازي آنتی بادي ضد آنزیم Pcsk9 | en_US |
| dc.type | Thesis | en_US |
| dc.contributor.supervisor | محمدی, ابوالقاسم | |
| dc.contributor.supervisor | مکوندی, مکوندی | |
| dc.contributor.department | بیوتکنولوژی پزشکی | en_US |
| dc.description.discipline | بیوتکنولوژی پزشکی | en_US |
| dc.description.degree | دکتری تخصصی | en_US |
