غربال کتابخانه فاژي آنتی بادي جهت جداسازي آنتی بادي ضد آنزیم Pcsk9

Abstract

آنزیم PCSK9 نقش مهمی در افزایش میزان C-LDL از طریق اتصال و تجزیه گیرندهLDL به عهده دارد. مهار این آنزیم توسط آنتیباديهاي منوکلونال یکی اهداف مهم در جهت پیشگیري از انسداد عروق قلبی ناشی از افزایش C-LDL است. فاژ دیسپلی یکی از روشهاي سریع و موثر جهت شناسایی آنتیبادي اختصاصی علیه پروتئین هدف میباشد. هدف این پژوهش جداسازي آنتیبادي اختصاصی علیه آنزیم PCSK9 با استفاده از تکنیک فاژدیسپلی است. روشها: آنتیژن PCSK9 توسط روش بر پایه برآیند اتصالی-اختصاصی تگهاي SpyCatcher/SpyTag Immobilize شد. ابتدا پروتئین SpyCatcher توسط روش خالص سازي غیر ستونی RTX آماده و در چاهکها کوت گردید. در مرحله بعد، لایزیت باکتري حاوي پروتئین نوترکیب حاوي تگ SpyT به چاهک ها اضافه شده و به SpyCatcher متصل شد. در ادامه کتابخانه سنتتیک نانوبادي مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از روشهاي پلیکلونال و منوکلونال فاژ الایزا ، کلونی که بیشترین جذب را نشان داد شناسایی و پس از تعیین توالی جهت بیان و اندازه گیري Affinity انتخاب شد. پس از بیان و خالص سازي آنتیبادي توسط ستون کروماتوگرافی NTA-Ni و روش غیر ستونی بر مبناي intein split Npu-ELP از لکه گذاري نقطه اي و الایزا جهت ارزیابی اختصاصیت و افینیتی آنتیبادي استفاده شد. نتایج: با استفاده از سیستم SpyCatcher/SpyTag ،هزینه، زمان ومراحل آماده سازي آنتیژن به صورت چشمگیري کاهش مییابد. با استفاده از کتابخانه سنتتیک، آنتیبادي اختصاصی علیه آنزیم PCSK9 جداسازي و با استفاده از روش غیر ستونی ELP ،آنتیبادي خالص شده با خلوص 90 درصد به دست آمد که مناسب تحقیقات آزمایشگاهی میباشد. نتیجه گیري: در این مطالعه با بهینه سازي فرآیند آماده سازي سریع آنتیژن و ساخت کتابخانه و دستورزي کتابخانه و در ادامه استفاده از روش غیر ستونی خالص سازي، یک سیستم مقرون به صرفه و نسبتا سریع انتخاب آنتیبادي ساخته شد که از آن جهت انتخاب علیه آنزیم PCSK9 استفاده گردید.