تعیین اثر اگزوزوم های مترشحه از رده سلولی سرطان معده بر خصوصیات تکثیری و مهاجرتی رده سلولی اندوتلیال HUVEC
چکیده
سرطان معده پنجمين سرطان شایع و سومین سرطان کشنده در جهان است. در ایران سرطان معده شایع ترین سرطان در مردان و سومین در زنان است. برخلاف کشورهای پیشرفته، میزان بروز این سرطان در ایران در حال افزایش است به نحوی که در مناطق شمال و شمال غرب به¬عنوان یک معضل مطرح می شود. اگزوزوم ها وزیکول های هموژن غشایی با قطر 40 تا 150 نانومتر هستند که از اگزوسیتوز وزیکول های درون سلولی مشتق شده و وقتی به فضای خارج سلولی آزاد می شوند که با غشای سلولی امتزاج یابند. اگزوزوم های مشتق از تومور یا به¬صورت موضعی آزاد می شوند و یا به داخل جریان خون وارد می شوند تا با سلولهای هدف خود که می تواند سلولهای ایمنی باشد، برهمکنش نمایند.
روش کار و مواد. رده سلولی MKN-45 در محیط کشت RPMI1640کشت داده شده و اگزوزوم های ترشحی استخراج می گردد. سلولهای HUVEC به¬عنوان مدل سلولی اندوتلیوم نیز کشت شده و تحت اثر اگزوزوم های تخلیص شده از رده سلولی MKN-45 قرار می گیرند. RNA سلولها استخراج شده و پس از سنتز cDNA، با استفاده از real-time PCR کمی mRNA و miRNA های کنترل کننده بیان ژنهای مرتبط با مهاجرت و تکثیر (miRNA های mir-152، mir-16 و mir-443 و ژن هدف ، VEGF و HIF-1α) بررسی خواهند شد. برای بررسی تکثیر سلولی نیز از آزمون MTT استفاده می شود. اثر اگزوزوم ها بر خصوصیات مهاجرتی نیز با آزمون خراش (wound healing or scratch) صورت می گیرد.
یافته ها. در معرض قرارگرفتن سلول های HUVEC با اگزوزوم های تخلیص شده از رده سلولی MKN-45 باعث ایجاد تغییراتی در بیان ژنهای مرتبط با مهاجرت و تکثیر این سلول ها گردید. بر اساس نتایج حاصل از مطالعه بیان miRNA های mir-152، mir-16 و mir-443 در سلول های تیمارشده با اگزوزوم های مذکور در مقایسه با سلول های تیمارنشده کاهش معناداری پیدا کرد و نیز بیان ژن هدف (VEGF و HIF-1α) در سلول های تیمارشده با اگزوزوم ها در مقایسه با سلول های تیمارنشده افزایش معناداری پیدا کرد. هم چنین نتایج آزمون MTT نشان دهنده افزایش تکثیر سلول های تیمارشده با اگزوزوم های مذکور بود.