بررسی تاثیر القاء آپوپتوز و فرپتوز بوسیله مهار بیان ژنهای AKT1 و GPX4 در شکست مقاومت به داروی اگزالی پلاتین، در لاین سلولی سرطان کولون

Abstract

با توجه به شیوع سرطان کولورکتال و ایجاد مقاومت به داروهای شیمی درمانی، نیاز به طراحی روشهای جدید درمانی میباشد. بنابراین در این مطالعه تاثیر دو استراتژی مرگ سلولی آپوپتوز و فروپتوز توسط SiRNA AKT1 و GPX4 بر سلولهای سرطانی HT29 مقاوم شده به اگزالی پلاتین بررسی گردید. هدف: بررسی تاثیر القاء آپوپتوز و فرپتوز بوسیله مهار بیان ژنهای AKT1 و GPX4 در شکست مقاومت به داروی اگزالی پلاتین، در لاین سلولی سرطان کولون. روش کار : رده سلولی سرطانی HT-29 مقاوم شده به داروی اگزالی پلاتین در شرایط معمول کشت داده شد. سپس سلولها در معرض Oxaliplatin همراه یا بدون مهار ژنتیکی قرار گرفتند. جهت مهار ژنتیکی siRNA طراحی شده برای ژنهای AKT1 و GPX4 بوسیله کیت هایپرفکت منتقل شد. موفقیت آمیز بودن مهار بیان ژن توسط تکنیک های Real-time PCR و وسترن بلاتینگ مطالعه شد. در ادامه جهت بررسی القاء آپوپتوز و فرپتوز از تکنیک فلوسایتومتری استفاده شد. نتایج: نتایج حاصل از تکنیکهای وسترن بلات، و Real-time PCR نشان دهنده موفقیت آمیز بودن مهار بیان ژنهای AKT1 و GPX4 در سل لاین HT-29 مقاوم به داروی اگزالی پلاتین بود. همچنین نتایج تکنیک فلوسایتومتری نشان داد در سلولهای تیمار شده با siRNA AKT1، بیش از 70% سلولها وارد فازهای آپوپتوتیک شده اند. نتایج رنگ آمیزی مولکولهای اکسیژن فعال مشتق شده از لپیدهای سلول نشان داد بالای 80% از سلولهای تیمار شده با siRNA GPX4، وارد فاز فرپتوز شدند. در نهایت نتایج توام درمانی اگزالی پلاتین با siRNAهای القاء کننده آپوپتوز و فرپتوز نشان داد خاموش کردن ژن های AKT1 و GPX4 می تواند در از بین بردن سلولهای دارای مقاومت دارویی نقش بسازی داشته باشند. نتیجه گیری: استفاده از استراتژی القاء فرپتوز می تواند جایگزین القاء آپوپتوز در از بین بردن سلولهای مقاوم در برابر شیمی درمانی باشد.