بررسی اثر مهار ژن های BMP4 و P21 با SiRNA کمپلکس شده با اگزوزوم بر مسیر پیام رسانی Wnt و تمایز سلول های بنیادی عصبی SH-SY5Y
چکیده
هدف اصلی این مطالعه، بررسی کارایی اگزوزم ها در انتقال موثر siRNA های BMP4 و P21 به سلول SH-SY5Y می باشد.
مواد و روش ها: اگزوزوم ها با اولتراسانتریفیوژ از محیط کشت سلول SH-SY5Y استخراج شدند و با استفاده از کیت ExoFection با siRNA ها مورد تست بارگیری شدند و سپس برای تعیین اثر siRNA ژن های BMP4 و P21 بر میزان بیان ژن های BMP4، P21 ، NeuroD1 و Prox1 در سلول های SH-SY5Y از روش Real Time PCR و Western blot استفاده گردید.
یافته ها: وجود مارکرهای اگزوزومی CD63 و CD9 با تکنیک فلوسایتومتری تائید گردید. اندازه اگزوزوم ها با DLS، 23/49 ± 43/8 نانومتر بدست آمد. نتایج ما نشان داد که سمیت اگزوزوم در مقایسه با لیپوزوم به طور معنی داری کم بود (p<0.0005) . ارزیابی سطح بیان ژن در سلول SH-SY5Y، افزایش معنی داری در بیان ژن های ProX1 و Neuro D1 نشان داد.