جداسازی و شناسایی مولکولی میکروارگانسیم های مولد آنزیم های پروتئاز و آمیلاز از عسل های غرب ایران و بهینه سازی رشد میکروارگانیسمها

Abstract

آلفا آمیلاز و پروتئاز آنزیمی های هستند که کاربردهای بسیاری در پزشکی و صنعت دارند. یکی از محدودیت های آنزیم در صنعت عدم تحمل شرایط سخت مانند درجه حرارت بالا، pH و شرایط کم آب است. هدف: این مطالعه با هدف غربالگری میکروارگانیسم های تولید کننده آلفا آمیلاز و پروتئاز از عسل به عنوان یک محیط با فعالیت آبی کم و یک منبع مناسب برای جداسازی میکروارگانیسم های تولید کننده آنزیم های پایدار و مقرون به صرفه است. مواد و روش: از روش Plackett-Burman برای بررسی تولید آلفا آمیلاز باکتریایی دوازده فاکتور مؤثر از جمله pH، میزان تلقیح، دما، زمان، نشاسته ذرت، KH2PO4، پپتون، MgSO4 ، CaCl2 ، NaCl ، گلیسیرین و عصاره مخمر انتخاب شد. به منظور تولید آنزیم پروتئاز فاکتورهای همچون دما، زمان، پروتئین سویا، KH2PO4 ، MgSO4 ، CaCl2 ، NaCl ، گلیسیرین و غلظت گلوکز استفاده شد. پایداری آنزیم های باکتریایی جداسازی شده در شرایط مختلف pH و دمای مورد بررسی قرار گرفت.

نتایج: از بین تمامی میکروارگانیسم های جدا شده، باسیلوس مگاتریوم و Bacillus safensis به ترتیب بیشترین میزان آلفا آمیلاز و پروتئاز را تولید کردند. بر اساس نتایج Box-Behnken بهترین شرایط برای تولید آلفا آمیلاز شامل دمای 35 درجه سانتیگراد ، 5 pH و نشاسته 40 گرم در لیتر برای پروتئاز دمای 35 درجه سانتیگراد، گلوکز 5/0 گرم در لیتر و پروتئین سویا 32/38 گرم در لیتر برای پروتئاز بود. پایداری آنزیم آلفا آمیلاز در pH 5 و طیف دمایی 40 درجه سانتیگراد تا 60 درجه سانتیگراد و برای پروتئاز pH در 9 و درجه حرارت در 50 درجه سانتیگراد نشان داد. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می دهد که آنزیم های جداسازی شده پتانسیل استفاده در فرآیندهای صنعتی را دارند.