جداسازی و ارزیابی قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی (scFv) اختصاصی رده سلولی متاستاتیک سرطان معده (MKN-45) توسط Panning بر سلول کامل با استفاده از تکنولوژی بیان بر روی فاژ

Abstract

در میان تومورهای جامد مختلف، سرطان معده یکی از برجسته ترین عوامل مرگ و میر ناشی از سرطان در دنیا است. گسترش به حفره پریتونئال که ناشی از انتشار سلول های سرطانی diffuse است علت اصلی مرگ و میر در بیماران مبتلا به آدنوکارسینوم معده محسوب می شود. هدف از مطالعه حاضر، شناسایی بیومارکرهای احتمالی درگیر در متاستاز رده سلولی diffuse آدنوکارسینومای معده (MKN-45) با استفاده از قطعات scFv حاصل از تکنولوژی فاژ دیسپلی هست. روش ها: کتابخانه scFv نیمه سنتتیک انسانی (Tomlinson I) برای ایزولاسیون قطعات آنتی بادی جدید شناسایی کننده MKN-45، رده سلولی diffuse کمتر تمایز یافته آدنوکارسینومای معده، استفاده شد. چهار راند انتخاب subtractive که هر کدام متشکل از جذب گسترده کتابخانه فاژی با رده های سلولی NIH-3T3 (فیبروبلاست جنین موشی) و AGS (آدنوکارسینومای intestinal معده) قبل از انتخاب مثبت بر روی سلول های هدف MKN-45 بود، انجام شد. آنالیز اختصاصیت قطعات scFv انتخاب شده توسط Whole cell ELISA و فلوسایتومتری مشخص شد. آنالیز LC-MS/MS برای شناسایی آنتی ژن های هدف انجام گرفت. ایمنوهیستوشیمی بر روی قطعات بافتی پارافینه بیوپسی های آدنوکارسینومای معده انجام شد. یافته ها: غربالگری مبتنی بر ELISA از 192 کلون فاژی نمایش دهنده scFv، 21 کلون دارای میل ترکیبی بالا با رنگ آمیزی اختصاصی سلول های MKN-45 در مقایسه با سلول های NIH-3T3 و AGSرا نشان داد. آنالیز تعیین تنوع فاژ-scFv های انتخاب شده منجر به 5 توالی مجزا با چندین تکرار شد. بررسی بیشتر توسط الایزا و فلوسایتومتری سه کلون که قادر به شناسایی اختصاصی سلول های MKN-45 بودند را تایید کرد. آنالیز LC-MS/MS پروتئین های رسوب داده شده منجر به شناسایی c-MET، HSP90 α و HSP90 β به عنوان کاندیدهای پروتئینی مرتبط با نوع diffuse سرطان معده شد. ایمنوهیستوشیمی، قابلیت scFv های تخلیص شده را در تمایز نوع diffuse و intestinal آدنوکارسینومای معده را نشان داد. نتیجه گیری : به طور خلاصه، ما به طور موفقیت آمیز یک سری از قطعات scFv را که قادر به افتراق رده سلولی diffuse آدنوکارسینومای معده، MKN-45، از نوع intestinal، AGS، بودند را جدا کردیم. قطعات scFv جدا شده و آنتی ژن های شناخته شده توسط آن ها ممکن است در غربالگری، مدیریت، targeting و درمان نوع diffuse آدنوکارسینومای معده مفید باشند.