بررسی میزان بیان پروتئین BMP2 و رسوب مواد معدنی استخوانی در محیط کشت حاوی سلول های ژله وارتون و میکرو RNA 424
چکیده
مقدمه و هدف: بازسازي استخوان هاي فكين در بيماري هاي مادرزادي شكاف كام و لب، جراحات و صدمات استخواني ناشي از تروما و تصادفات، نقائص ايجاد شده به علت وجود ضايعات بدخيم و يا خوش خيم استخواني كه گاها منجر به برداشت قسمت اعظمي از فكين مي شود همواره بحث برانگیز می باشد. در سال های اخیر گزارش های تنظیم تشکیل استخوان بوسیله miRNA ها ارائه شده است که حاکی از نقش miRNA 424 در پرولیفراسیون و تمایز استئوژنیک از سلول های بنیادی مزانشیمی است. هدف از انجام این مطالعه بررسی تاثیر miRNA 424 در محیط ازمایشگاهی بر میزان استخوان سازی سلول های بنیادی ژله وارتون از طریق استخراج پروتئین های مربوطه و رنگ امیزی بافت معدنی می باشد.
روش کار: وکتور حاوی ژن های MIR424 و BMP2 و مارکر GFP در پایه لنتی ویروس طراحی و سنتز شد. پس از تأیید وکتور، برای Packaging از سلول های HECKT293 استفاده شد. محیط روی سلول ها در زمان های 24، 48 و 72 ساعت جمع آوری شده و بر روی سلول های ژله وارتون ریخته شد. میزان بیان ژن BMP2 از طریق PCR و میزان ترشح BMP2 در محیط از طریق الایزا و میزان رسوب مواد معدنی از طریق رنگ آمیزی آلیزارین رد بررسی شد.
یافته ها: بر اساس نتایج این مطالعه میزان BMP2 ترشح شده در محیط در حضور میکرو RNA424 ( گروه مورد) در مقایسه با عدم حضور آن (گروه شاهد) به میزان 0434/8 برابر افزایش یافته بود. میزان رسوب ترکیب BMP2 با آنتی بادی اختصاصی آن در گروه مورد 32 و در گروه شاهد 9 بود که پس از انجام تحلیل آماری اختلاف میان این دو با 05/0>P معنی دار گزارش شد. میزان رسوب رنگ در رنگ آمیزی با آلیزارین رد در گروه مورد 7/0 و در گروه شاهد 2/0 در طول موج 405 نانومتر بود . این تغییر رنگ از نظر آماری با 05/0>P معنی دار گزارش شد.
بحث: بر اساس نتایج این مطالعه آزمایشگاهی میزان بیان ژن BMP2 در مجاورت MIR424 به مرتب افزایش می یابد. در نتیجه می توان از این تکنیک برای بازسازی استخوان در مدل های حیوانی استفاده کرد تا بعدها نتایج این مطالعات زمینه را برای کاربرد ژن درمانی در بازسازی استخوان فراهم کند.