بررسی تولید و تخلیص دمین آنتی بادی D47 علیه FGF7 انسانی شناسایی شده به روش نمایش فاژی

Abstract

مقدمه:‌ فاکتور رشد فیبروبلاستی ۷ (FGF7) یکی از اعضای خانوادهی ۲۳ عضوی FGF بوده و فرآیند تکثیر را در سلولهای اپیتلیال تحریک کرده و باعث تمایز، مهاجرت و آنژیوژنر میشود. فیبروبلاست های وابسته به سرطان (CAFs) نوعی سلول داخل توموری محسوب میشوند که ويژگی های تومورزایی را القا می کنند. مطالعات نشان داده است که ترشح FGF7 از آن ها به رشد تومورهای سرطانی کمک می‌کنند. بنابراین مهار فاکتور رشد فیبروبلاستی ۷ می تواند یکی از راهکارهای درمانی سرطان باشد. اهداف: هدف از این مطالعه تولید، تخلیص و بررسی توانایی اتصال دمین آنتی بادی (sdAb) D47 علیه FGF7 انسانی شناسایی شده به روش نمایش فاژی (phage display) است. روش کار: ژن تولید دمین آنتی بادی D47 در وکتور pET28a کلون شد و وارد سلول های E.coli Bl21 plysS گردید. پس از بیان پروتئین، تخلیص به روش کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از ستون نیکل-سفاروز انجام گرفت. ارزیابی بیان و خالص سازی sdAb تولید شده با تکنیک های وسترن بلات و SDS-PAGE انجام شد و در ادامه جهت بررسی توانایی اتصال دمین آنتی بادی تولید شده به FGF7 از روش الایزا استفاده گردید. یافته ها: دمین آنتی بادی D47 در سیستم بیانی باکتریایی تولید شد. باند پروتئین ظاهر شده در حدود kDa ۱7 در ژل SDS-PAGE با sdAb مورد نظر مطابقت داشت که نتایج تست وسترن بلات هم این موضوع را اثبات کرد. همچنین با استفاده از تکنیک الایزا مشخص شد که sdAb تولید شده تمایل مناسبی برای اتصال به FGF7 دارد. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در مطالعه ی حاضر می تواند زمینه را برای طراحی دمین‌آنتی بادی های جدید علیه FGF7 فراهم کند.