بررسی اثر افزایش بیان 7SK snRNA با استفاده از وکتورلنتی ویروسی برمیزان mRNA مارکرهای آپاپتوتیک و آنتی آپاپتوتیک BCL2 ,BAX در سلولهای سرطانی HEK293T
چکیده
مقدمه:Non-coding RNAs با ایفای نقش تنظیمی در فرایندهای گوناگون سلولی به عنوان یکی از اعضای مهم در ایجاد سرطان معرفی می گردند. ازآن جمله 7sk snRNA را می توان نام برد که با مهار کمپلکس P-TEFb ، قادر است بیان اکثر ژنهاییکه بوسیله RNA پلی مراز II رونویسی می شوند را کنترل نماید. با توجه به اینکه فعالیت P-TEFb بوسیله 7sk snRNAمهار می شود احتمال دارد بیان آن در سلول ها و بافت های سرطانی کاهش یافته باشد.
هدف:1-بررسی اندازه گیری بیان 7sk در بافت ها و سلول های سرطانی2-بررسی اثر آنتی آپوپتوتیکی 7 SK با افزایش و کاهش بیان آن در سلول های سرطانی HEK 293T
روش کار و مواد:رده سلول های سرطانیHL60،MDA-MB-231، jurcatورده سلول های نرمالNeutrophil lymphocyteوMcf10کشت داده شدند.بافت سرطانی و نرمال خون، کلون و سینه نیز به صورت هدیه دریافت شد.سپس استخراج RNA از آنها صورت گرفت و برای Gapdh و 7sk snRNA ،Real time PCR گذاشته شد7sk snRNAدر سلول های293THEK ترنسفکت شد و میزان بیان ژن های آپاپتوتیک و آنتی آپاپتوتیک توسط Real time PCR اندازه گیری شد. همچنین میزان زنده مانی سلول ها با روش MTT و تاثیر 7sksnRNA بر سیکل سلولی با روشCell cycle و Annexin Vبررسی شد.میزان مهاجرت سلول ها ی سرطانی و قدرت تهاجم آنها نیز بعد از ترنسفکشن اندازه گیری شد.
یافته ها:سطح 7sk snRNA در سلول و بافت سرطانی نسبت به نرمال پایین بوده ،همچنین بعد از ترنسفکشن 7sk snRNA میزان بیان ژنهای آپاپتوتیک افزایش ومیزان بیان ژنهای آنتی آپاپتوتیک کاهش یافت. همچنین میزان مهاجرت سلول ها کاهش یافت و توقف در sub G1 که نشان دهنده آپاپتوز می باشد مشاهده شد.