تخلیص باکتریوسن های انتروکوکی ایزوله شده از فراورده های دامی و بررسی اثرات ضد میکروبی آنها

Abstract

مقدمه:پدیده مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری ها، در سال های اخیر به یک مشکل جهانی تبدیل شده است. از طرفی نبود آنتی بیوتیک های کارآمدتر در آینده باعث می شود پدیده مذکور به یک بحران بزرگ در حوزه بهداشت و سلامت تبدیل شود. در این رابطه، پپتیدهای آنتی میکروبیال تولید شده توسط پروکاریوتها با داشتن طیف اثر باریک و پوتنسی بالا و اثرات باکتروسیدال و باکتریواستاتیک علیه گونه های نزدیک گونه مولد، به عنوان یکی از کاندیدهای نسل جدید آنتی بیوتیکی و مکمل برای آنتی بیوتیک های رایج مطرح می باشند.هدف:هدف از پروژه حاضر جداسازی باکتریوسن های تولید شده به وسیله ایزوله های انتروکوکسی دامی، از منطقه شمالغرب ایران و بررسی فاکتورهای مختلف در تولید عوامل ضد میکروبی و بررسی اثرات ضد میکروبی آنها در حالت خالص می باشدروش کار:از بین 11 ایزوله انتروکوکسی دامی باکتریوسین مثبت، قوی ترین گونه مولد، طبق متد لکه گذاری در آگار شناسایی و برای مراحل آتی پژوهش، مورد استفاده قرار گرفت. میزان تولید باکتریوسین با تغییر محیط کشت، افزودن لاکتوز و استفاده از متد کشت همزمان مورد ارزیابی قرار گرفت. مایع رویی حاصل از کشت شبانه گونه مولد، بعد از سانتریفیوژ به وسیله آمونیوم سولفات ترسیب داده شد. ماهیت پپتیدی مواد ضد میکروبی نیمه خالص از ترسیب، با تست های از بین 11 ایزوله انتروکوکسی دامی باکتریوسین مثبت، قوی ترین گونه مولد، طبق متد لکه گذاری در آگار شناسایی و برای مراحل آتی پژوهش، مورد استفاده قرار گرفت. میزان تولید باکتریوسین با تغییر محیط کشت، افزودن لاکتوز و استفاده از متد کشت همزمان مورد ارزیابی قرار گرفت. مایع رویی حاصل از کشت شبانه گونه مولد، بعد از سانتریفیوژ به وسیله آمونیوم سولفات ترسیب داده شد. ماهیت پپتیدی مواد ضد میکروبی نیمه خالص از ترسیب، با تست های پایداری حرارتی، آنزیمی و تغییرات pH مورد بررسی قرار گرفت. آنالیز پپتیدهایی باکتریایی نیمه خالص به وسیله کروماتوگرافی تعویض یونی، نشان دهنده دو پیک بود که پیک دوم خاصیت آنتی باکتریال بیشتری را نشان داد.یافته هابا توجه به نتیجه آزمایشات بیواسی و میکروتیتر علیه گونههای اندیکاتورها در نهایت باکتری E. faecalis برای آزمایشات تکمیلی انتخاب شد. افزودن لاکتوز یا باکتری القاگر به محیط کشت و یا استفاده از محیط کشت MRS، افزایش معنی داری را در تولید باکتریوسین نشان داد. میکروتیتراسی پلتهای بدست آمده از ترسیب با آمونیوم سولفات دارای اثر ضدمیکروبی بود و تستهای پایداری بروی پلتها، نشان دهنده ماهیت پپتیدی آنها بود. در کروماتوگرافی تعویض یونی باکتریوسین با خلوص نسبی، دو پیک بدست آمد؛ که پیک دوم نسبت به پیک اول دارای اثرات آنتی باکتریال بیشتری بود.