جدا سازی قطعاتscFv آنتی بادی علیه 4-1BB از کتابخانه ی آنتی بادی فاژی و بررسی عملکرد آن

Abstract

هدف از این مطالعه، جدا سازی قطعاتscFv آنتی بادی علیه 4-1BB از کتابخانه ی آنتی بادی فاژی و بررسی عملکرد آن می باشد. دراین مطالعه، با استفاده از تکنیک پنینگ ‌‌scFvهایاختصاصی علیه دو ناحیه 14اسید آمینه ای از دُمِین خارج سلولی 4-1BBرا از کتابخانه آنتیبادی فاژی جداسازی کردیم. اختصاصیت‌ scFvهای جداسازی شده را با استفاده از روش‌های مختلفی از جمله پلی کلونال الایزا، مونوکلونال الایزا، الایزای فاز محلول، کلونی پی سیآر (colony PCR) ، تکنیک Fingerprintingو سکانس ژن بررسی شد. برای ارزیابی عملکرد قطعه scFv تولید شده، بیان ژن سایتوکاین ها و تولید سایتوکاین IFN- لنفوسیت های T بررسی شد. همچنین بیان مارکرهای فعالیت سلول های Tبا استفاده از روش فلوسایتومتری و آنتی بادی های نشاندار شده با مواد فلوروکروم بر ضد ،CD69 ارزیابی شد. نتایج الایزا اختصاصیت scFvهای جداسازی شده نسبت به پپتید4-1 BB را تایید کرد و با آنالیز محصول پیسیآر (PCR product) و سکانس ژن مشخص شد که ژن جداسازی شده مربوط به مناطق متغییر زنجیره‌های سبک و سنگین (VH and V) میباشد. در بررسی عملکرد scFvهای جداسازی شده مشخص شد که این scFvها میتوانند لنفوسیت های T را به خوبی تحریک کنند و به همراه این تحریک موجب تولید سایتوکاین و بیان مارکرهای فعالیت نیز شوند.