اثر سایتوتوکسیک عصاره متانولی گیاه دارویی گل میمونی گونه آذری(Scrophularia Atropatana) در القای آپوپتوز در سلول های سرطانی WEHI-164 و MCF-7

Abstract

This study is the first to investigate the cytotoxic and apoptotic effect of Scrophularia atropatana extract in MCF-7 human breast carcinoma cell line and WEHI-164 fibrosarcoma cell line. In this study three extracts of Scrophularia atropatana including the n-hexane, methanol and dichloromethane extracts were examined. Cytotoxic effect of Scrophularia atropatana extract was measured using MTT and Trypan-blue assays. To show induction of apoptosis by this plant, cell death assay, TUNNEL test, DNA Fragmentation, Western blot and Real-Time PCR were performed. In the present study n-hexane extract had no cytotoxic effect but methanol and dichloromethane extracts noticeably killed cancer cells. Furthermore, dichloromethane extract had more potent cytotoxic effects than the methanol extract. This extract did not show cytotoxic impacts on L929 cells. TUNNEL test and DNA Fragmentation assay showed apoptotic characteristic in the extract treated cells. Western blot test showed cleavage of PARP. Furthermore, Real-Time PCR analysis showed the mRNA expression level of caspase-3 increased but expression level of bcl-2 decreased in the cells treated with the extracts., در این مطالعه سه عصاره ان-هگزانی، دی کلرومتانولی و متانولی گیاه گل میمونی آذری مورد بررسی قرار گرفت. برای بررسی اثرات سایتوتوکسیک عصاره های گیاه Scrophularia atropatana تست MTT و تریپان بلو انجام گرفت. در مرحله ی بعد بررسی نوع مرگ سلولی و القا آپوپتوز با DNA Fragmentation، Cell Death assay، تست تانل، وسترن بلات و Real-Time PCR بررسی شد.نتایج این مطالعه نشان داد که عصاره ان-هگزانی فاقد اثرات سایتوتوکسیک می باشد، در حالی که عصاره های متانولی و دی کلرومتانولی به طور معنی داری سلول های سرطانی را از بین بردند. همچنین نشان داده شد که عصاره دی کلرومتانولی در مقایسه با عصاره متانولی دارای اثرات سایتوتوکسیک بیشتری می باشد. با تست DNA Fragmentation و تست تانل یکی از خصوصیات مورفولوژیک مهم آپوپتوز در سلول های تیمار شده با عصاره نشان داده شد. آنالیز وسترن بلات وجود قطعات PARP را نشان داد، همچنین نتایج مطالعه ی بیان ژن های Bcl-2،caspase-3 با استفاده از Real-Time PCR نشان داد که میزان بیان ژن caspase-3 در سلول های تیمار شده با عصاره افزایش یافته، در مقابل میزان بیان ژن Bcl-2 در سلول های تیمار شده کاهش می یابد.