مهار بیان CTLA-4 در سلولهای سرطان مری به منظور بررسی اثرات آپوپتوتیک

Abstract

سرطان مری نوعی سرطان است که در مری ایجاد می‌شود. مری وظیفه انتقال غذا به معده را دارد و در بین حلق و معده قرار گرفته‌است. علائم این بیماری شامل سختی در بلعیدن غذا و کاهش وزن می‌شود. CTLA-4 مولکول های مهاری تنظیم کننده ی سیستم ایمنی هستند که با بیان در سطح سلول های سرطانی، در کاهش عملکرد سلول های ایمنی نقش دارند. در این مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصی، بیان ژن های CTLA-4 سرکوب شده و تاثیر این سرکوب همزمان بر رشد ، مهاجرت و آپوپتوز سلول های سرطانی ارزیابی گردد. مواد و روش ها: ابتدا رده سلولی سرطان مری (TE-8) کشت داده شد . سپس siRNA اختصاصی ژن CTLA-4 به رده ی سلولی مورد نظر ترانسفکت شد. جهت بررسی اثر سایتوتوکسیک siRNA منتقل شده تست MTT انجام گرفت. جهت بررسی این سرکوب ژنی بر میزان رشد و تکثیر سلول های سرطانی، ژن های دخیل در آپوپتوز و فعالیت هسته ای BAX,BCL-2, CAS-3,CAS-9) ) به روش RT-PCRمورد بررسی قرار گرفت. همچنین میزان زنده مانی سلول های سرطانی و چرخه سلولی آنها هم مورد بررسی قرار گرفت. پس از جمع آوری داده ها در نرم افزار Excell ، سازمان دهی داده ها انجام شد و سپس با استفاده از نرم افزار prism توزیع داده ها بررسی شده و برای توزیع نرمال از آزمون،T- Test و برای داده های با توزیع غیر نرمال از آزمون Mann-Whitneyاستفاده شد. یافته ها: در رده سلولی سرطانی مری کاهش معنی داری از بیان CTLA-4 را پس از اضافه کردن siRNA ضد CTLA-4 مشاهده کردیم. در مقایسه با گروه کنترل نتایج ما بطور معناداری فراوانی کاهش یافته ژن های دخیل در فرآیند ضد آپوپتوز مثل BCL-2 بعد از اضافه کردن siRNA CTLA-4 را نشان داد. در حالی که ژن های دخیل در آپوپتوز مثل BAX افزایش معنی داری را نشان داد. همچنین داده های حاصل از MTT نشان داد که بعد از اضافه کردن CTLA-4 siRNA میزان رشد و تکثیر سلول های سرطانی کاهش یافت.