بررسی تاثیر مهار همزمان بیان ژن های K-Ras و Akt در تغییر حساسیت به داروهای شیمی درمانی در سل لاین های کولورکتال K-Ras موتانت و نرمال

Abstract

جهش‌ها در ژن‌های Ras مسئول نزدیک به ۳۰٪ از سرطان‌ها در انسان هستند و K-Ras بیشترین تغییرات را دارد. جهش‌های K-Ras باعث فعال‌سازی مداوم مسیرهای پایین‌دست می‌شود. اگرچه هدف قرار دادن K-Ras اهمیت دارد، مهار آن باعث فعال‌سازی مسیر AKT می‌شود. بنابراین، مهار همزمان هر دو K-Ras و AKT پتانسیل خوبی برای کاهش تومورزایی سلولی دارد. با این حال، درمان‌های کنونی به راهکارهای دوگانه‌هدف‌گیری کارآمد نیاز دارند. رویکردهای نوآورانه برای مقابله با چالش‌های درمانی لازم است. هدف: طراحی shRna های مهارکننده AKT و K-Ras.بررسی تاثیر مهار همزمان بیان ژن های K-Ras و Akt در تغییر حساسیت به داروهای شیمی درمانی در سل لاین های کولورکتال K-Ras موتانت و نرمال.مواد و روش ها:در این مطالعه، وکتورهای پلاسمیدی حاوی shRNA های طراحی شده تهیه و در پلاسمید انتقال دهنده کلون شدند. این پلاسمیدها به دو رده سلول سرطانی، CACO2 (K-Ras نرمال) و AGS (K-Ras(G12D))، ترنسفکت شدند. برای ارزیابی زنده‌مانی سلول‌ها، از آزمون MTT استفاده شد. همچنین، از روش فلوسایتومتری برای اندازه‌گیری اثرات آپوپتوتیک بهره گرفته شد. تأثیر مهارکننده‌های shRNA از طریق تیمار با کبالت و تجزیه و تحلیل داده‌های RT-PCR بررسی شد. تحلیل مقایسه‌ای بین رده‌های سلولی K-Ras نرمال و K-Ras جهش‌یافته انجام خواهد شد تا نتایج مشخص شود.نتایج:در این مطالعه، shRNA ها بیان پروتئین‌های AKT و K-Ras را در رده‌های سلولی سرطانی کاهش دادند، که منجر به کاهش زنده‌مانی و القای آپوپتوز شد. تیمار با کبالت و تجزیه و تحلیل RT-PCR این اثرات را تأیید کردند. تحلیل مقایسه‌ای نیز کارایی این روش را پشتیبانی کرد.نتیجه گیری: shRNA های طراحی شده به طور مؤثری AKT و K-Ras را در سلول‌های سرطانی هدف قرار دادند و پتانسیل امیدوارکننده‌ای به عنوان یک روش درمانی برای سرطان کولورکتال نشان دادند.