تهیه و مشخصه یابی حامل لیپیدی حاویsiRNA و ارزیابی اثر آن بر گیرنده پورینرژیک در سلول های سرطان سینه

Abstract

مقدمه؛ تحویل موفقیت آمیز RNAاز طریق نانوذرات لیپیدی (LNP) به میزان ونحوه دستکاری و بکارگیری لیپید یونیزه شونده (IL)به عنوان جزء ضروری در عملکرد نانوذره لیپیدی بستگی دارد. P2X7R، گیرنده پورینرژیک تنظیم کننده حیاتی (PUR) در تکثیر تومور، آپوپتوز و متاستاز است. سرکوب P2X7R از طریق رنا مدخله گرکوچک (siRNA) یک رویکرد درمانی بالقوه در درمان سرطان پستان است. هدف؛ سنتز لیپید یونیزه شونده برای افزایش جذب سلولی siRNA-LNP فرموله شده برای بهبود تحویل کارآمدsiRNA-P2X7 (siP2X7) برای مهار مهاجرت و القای آپوپتوز در سرطان پستان.روش کار؛ لیپید یونیزه شونده سنتزی (SIL) از طریق واکنش تریس آمین و لوریل آکریلات، به دست آمد، سپس محصول تحت آنالیزهای ساختاری (FT-IR، H-NMR و LC-MS) تایید و تخلیص شد . فرمولاسیون نانو ذره لیپیدی پس از مشخصه یابی با DLS و TEM، سنجش ناخالصی، سمیت سلولی و جذب به ترتیب با آنالیز HPLC-ELSD، سنجش MTT و میکروسکوپ کانفوکال مورد ارزیابی قرار گرفت. در نهایت، مهار مهاجرت از طریق سنجش خراش و القای آپوپتوز با استفاده از فلوسیتومتری در شرایط برون تنی مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها؛ LNP-siP2X7 با مشخصه یابی عالی به دست آمد. سپس جذب سلولی siP2X7-LNP با دز بهینه (45 پیکو متر) و زمان انکوباسیون (12 ساعت) تعیین شد. مهار مهاجرت در 48 ساعت انکوباسیون با 62/60٪ منطقه بسته شدن گسترش یافته و نرخ آپوپتوز اولیه (8/95٪) در 24 ساعت و آپوپتوز دیررس (35٪) در 48 ساعت در سول های سرطان پستان 4T-1 دیده شد. در نهایت، بیان پروتئین P2X7R به طور قابل توجهی پس از 48 ساعت از طریق ارزیابی وسترن بلات مشاهده شد. نتیجه؛ لیپید یونیزه سنتز شده نقش مهمی را در تحویل کارآمد siP2X7-LNP در برابر سلول‌های سرطان پستان موش برای بهبود زخم و القای آپوپتوز نشان می‌دهد که منجر به مدل تحویل siRNA-LNP کارآمد در سرطان پستان می‌شود.