بررسی تاثیر مهار LncRNA-ZEB2-AS1 بر روی بیان ژن سرکوبگر تومور PTEN و مهار تکثیر سلول¬های سرطانی کبد

Abstract

سرطان کبد به عنوان یکی از رایجترین سرطان¬های عامل مرگ در جهان شناخته می¬شود. مطالعات پیشین نشان داده¬اند که ZEB2-AS1 lncRNA در پاتوژنز بدخیمی¬های متعدد انسانی نقش مهمی ایفا می¬کند. با این وجود نقش ZEB2-AS1 در سرطان کبد به ندرت مورد مطالعه قرار گرفته است. بنابراین هدف از مطالعه حاضر بررسی میزان بیان ژن¬های PTEN و ZEB2-AS1 در بیماران مبتلا به سرطان کبد و تاثیر سرکوب ZEB2-AS1 بر بیان ژن PTEN و تکثیر سلولی بود. مواد و روش¬ها: در مطالعه حاضر 30 بافت توموری و بافت غیر توموری مجاور از بیماران مبتلا به سرطان کبد مراجعه کننده به مراکز درمانی وابسته به دانشگاه علوم پزشکی تبریز جمع آوری شد. پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از نمونه¬های بافتی، میزان بیان ژن¬های PTEN و ZEB2-AS1 با استفاده از تکنیک Real-Time PCR بررسی شد. در ادامه سلول¬های سرطانی کبد HepG2 کشت داده شده و سپس غلظت¬های مختلف siRNA ضد ZEB2-AS1 توسط الکتروپوریشن ترانسفکت شد. سپس تاثیر ترانسفکشن بر روی میزان بیان ژن¬های PTEN و ZEB2-AS1 و همچنین ژن¬های آپوپتوزی مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت میزان تکثیر سلول¬های سرطانی کبد ترانسفکت شده از روش MTT استفاده شد. نتایج: میزان بیان ژن¬های ZEB2-AS1 و PTEN در بافت سرطانی کبد بطور معنی داری نسبت به بافت مجاور غیر سرطانی افزایش پیدا کرد. پس از ترانسفکشن siRNA ضد ZEB2-AS1 به سلول¬های سرطانی، بیان ژن ZEB2-AS1 بطور معنی داری کاهش یافت؛ در ادامه بیان ژن PTEN در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده با افزایش معنی دار همراه بود. همچنین میزان بیان ژن¬های القاء کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری افزایش یافت؛ در حالی که میزان بیان ژن مهار کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری کاهش یافت. بررسی بقاء سلولی نشان داد که سرکوب بیان ژن ZEB2-AS1، بقاء سلول¬های سرطانی کبد را بطور وابسته به دوز و زمان کاهش می¬دهد.