بررسی سیگنالینگ MAPK و میزان بیان TLR2 در سلولهای منوسیت حاصل از خون بیماران CYSTIC FIBROSIS

Abstract

فیبروز کیستیک (CF) با التهاب مزمن و عفونت های مداوم مشخص می شود که منجر به عوارض و مرگ و میر قابل توجهی می شود. درک مکانیسم های مولکولی زیربنایی پاسخ های ایمنی در CF برای توسعه درمان های هدفمند بسیار مهم است. این مطالعه به بررسی بیان و مسیرهای سیگنالینگ پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن (MAPK) و گیرنده شبه Toll 2 (TLR2) در سلول های مونوسیت مشتق شده از بیماران CF می پردازد. روش کار و مواد: در این مطالعه مشاهده ای از 20 بیمار مبتلا به فیبروز کیستیک مراجعه کننده به درمانگاه بیمارستان امام رضا (ع) نمونه خون جمع آوری شد. سلول های مونوسیتی با استفاده از تکنیک PBMC از طریق MACS جداسازی شدند و از آنتی بادی CD14 برای ارزیابی خلوص از طریق فلوسیتومتری استفاده شد. سلول ها در محیط RPMI1640 حاوی 10% FBS و 1% Penestrep کشت داده شدند و با TLR2 در 0، 12، 24 و 48 ساعت تحریک شدند. RNA کل با استفاده از محلول Trizol استخراج شد. cDNA از mRNA سنتز شد و بیان ژن TLR2 با Real-Time PCR اندازه‌گیری شد. بیان MAPK با استفاده از تکنیک وسترن بلات ارزیابی شد. یافته ها: تجزیه و تحلیل وسترن بلات افزایش قابل توجهی در بیان پروتئین MAPK در سلول‌های مونوسیت تحریک‌شده در مقایسه با سلول‌های غیر تحریک‌شده، با سطح پروتئین نسبی به طور قابل‌توجهی در شرایط تحریک‌شده بالاتر نشان داد. برعکس، تجزیه و تحلیل Real-Time PCR تفاوت معنی داری را در بیان mRNA TLR2 بین مونوسیت های بیماران CF و گروه کنترل نشان نداد، با هر دو گروه مقدار تغییر برابر mRNA 1.0 را نشان دادند.