بررسی اثر anti-mir21 بر آپوپتوزیس رده A-375 ملانوما

Abstract

سرطان شامل گروهی از بیماری‌ها است که مشخصه‌ی اصلی آنها رشد سلولی تنظیم نشده‏، تهاجم و انتشار سلول‌ها از مکان اولیه به سایر نقاط بدن است. با وجود پیشرفت های اخیر در تشخیص و درمان، بیماری سرطان یکی از عوامل مهم مرگ و میر در دنیا می‏باشد. علاوه بر عوامل ژنتیکی و محیطی، عوامل اپی‏ژنتیکی در اتیولوژی سرطان دخیل می‏باشند. سرطان در ایران بعد از مشکلات قلبی و سوانح رانندگی سومین علت مرگ و میر است، مرگ ناشی از سرطان در دهه‌های اخیر در حال افزایش می‏باشد؛ آپوپتوز فرآیند مرگ برنامه ریزی شده سلولی است. در مراحل اولیه رشد برای از بین بردن سلول های ناخواسته استفاده می شود. در بزرگسالان، آپوپتوز برای محافظت از بدن در برابر سلول هایی که غیرقابل ترمیم بوده و آسیب دیده اند استفاده می شود. همچنین ثابت شده است آپوپتوز در پیشگیری از گسترش سرطان نقش موثری دارد.این مطالعه نیز با هدف بررسی میزان موفقیت مورد هدف قرار دادن miRNA-21 برای پیشگیری از پیشرفت و گسترش ملانوما انجام می شود؛ لذا هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر anti-mir21 بر آپوپتوزیس رده A-375 ملانوما می باشد. مواد و روش‌ها: ابتدا سلول‏های ملانوماA-375 در محیط کشت RPMI حاوی FCS 10% در دمای 37ₒc و CO2 5% کشت داده می‏شود‏، سپس ژنanti-mir21همراه وکتور و معرف ترانسفکت کننده Lipofectamin2000 به محیط کشت اضافه می‏گردد‏. انکوباسیون انجام می‏گیرد، میزان رشد و پرولیفراسیون سلول‏های سرطانی توسط تکنیک MTT مورد بررسی قرار می‏گیرد. بعد از ترانسفکتanti-mir21وگذشت مدت زمان لازم محیط کشت با محیط کشت حاوی MTT تعویض می‏شود و بعد از 4 ساعت انکوباسیون توسط دستگاه ELISA Plate reader‏ جذب نوری در طول موج 570nm قرائت می‏شود. میزان مهاجرت و متاستاز سلول‏های سرطانی بعد از ترانسفکت بوسیله آزمایش Wound healing assay بررسی می‏گردد. 5x105 سلول ترانسفکت شده با MIR-21در محیط کشت انکوبه شده شیاری در محیط ایجاد می‏شود، بعد از شستشوی محیط با PBS انکوباسیون انجام می‏گیرد وسپس از محل شیار توسط میکروسکوپ عکس‏برداری می‏شود ومهاجرت سلول‏ها از لبه شکاف به داخل آن بررسی می‏گردد.میزان آپوپتوز نیز با استفاده از تکنیک فلوسیتومتری آنکسین 5 و PI نیز انجام می گیرد یافته‌ها: تکثیر سلولهای سرطانی بعد از مواجهه با انکومیر ها کاهش کرد.ومتاستاز سلولهای ملانومایی بعد از مواجهه با انکو میر ها کاهش یافت.