ارزیابی میزان بیان lncRNA OIP5-AS1 و ROCK1 در بیماران مبتلا به سرطان معده و تاثیر سرکوبlncRNA OIP5-AS1 بر روی بیان ژن ROCK1 و کاهش تکثیر سلولی

Abstract

سرطان معده به عنوان چهارمین سرطان شایع و دومین عامل مرگ بر اثر سرطان در جهان شناخته می¬شود. مطالعات پیشین نشان داده¬اند که OIP5-AS1 lncRNA در پاتوژنز بدخیمی¬های متعدد انسانی نقش مهمی ایفا می¬کند. با این وجود نقش OIP5-AS1 در سرطان معده به ندرت مورد مطالعه قرار گرفته است. بنابراین هدف از مطالعه حاضر بررسی میزان بیان ژن¬های OIP5-AS1 و ROCK1 در بیماران مبتلا به سرطان معده و تاثیر سرکوب OIP5-AS1 بر بیان ژن ROCK1 و تکثیر سلولی بود. مواد و روش¬ها: در مطالعه حاضر 30 بافت توموری و بافت غیر توموری مجاور از بیماران مبتلا به سرطان معده مراجعه کننده به مراکز درمانی وابسته به دانشگاه علوم پزشکی تبریز جمع آوری شد. پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از نمونه¬های بافتی، میزان بیان ژن-های ROCK1 و OIP5-AS1 با استفاده از تکنیک Real-Time PCR بررسی شد. در ادامه سلول¬های سرطانی معده AGS کشت داده شده و سپس غلظت¬های مختلف siRNA ضد OIP5-AS1 توسط الکتروپوریشن ترانسفکت شد. سپس تاثیر ترانسفکشن بر روی میزان بیان ژن¬های ROCK1 و OIP5-AS1 و همچنین ژن¬های آپوپتوزی مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت میزان تکثیر سلول¬های سرطانی معده ترانسفکت شده از روش MTT استفاده شد. نتایج: میزان بیان OIP5-AS1 در بافت سرطانی معده بطور معنی داری نسبت به بافت مجاور غیر سرطانی افزایش پیدا کرد؛ در حالی که میزان بیان ژن ROCK1 در بافت سرطانی معده بطور معنی داری نسبت به بافت مجاور غیر سرطانی افزایش پیدا کرد. پس از ترانسفکشن siRNA ضد OIP5-AS1 به سلول¬های سرطانی، بیان ژن OIP5-AS1 بطور معنی داری کاهش یافت؛ در حالی که بیان ژن ROCK1 در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده با کاهش معنی دار همراه بود. همچنین میزان بیان ژن¬های القاء کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری افزایش یافت؛ در حالی که میزان بیان ژن مهار کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری کاهش یافت. بررسی بقاء سلولی نشان داد که سرکوب بیان ژن OIP5-AS1، بقاء سلول¬های سرطانی معده را بطور وابسته به دوز و زمان کاهش می¬دهد.