بررسی تاثیر سویه‌های مختلف باکتری مهندسی شده E.coli در میزان بیان IGF-1 نوترکیب

Abstract

مقدمه: IGF-I فاکتور رشد مهمی است که با ارتقاء عمل هورمون رشد هیپوفیزی، رشد طولی و آنابولیک بدن انسان را واسطه‌گری می‌کند. IGF-I نوترکیب انسانی با نام ژنریک Mecasermin برای درمان طولانی‌ مدت اختلال رشد در کودکان با فقدان IGF-I به کار می‌رود. به منظور استفاده از پروتئین نوترکیب انسانی IGF-I برای مقاصد درمانی نیازمند تولید این پروتئین در مقیاس بالا هستیم. به منظور تعیین شرایط تولید ایده‌ آل بایستی فاکتورهای متعددی از جمله شرایط بیان و القا، پروموتر، سویه باکتریایی و محلولیت پروتئین را مورد بررسی قرار داد. هدف: انتخاب سویه بیانی مناسب برای تولید.روش کار: پس از ترنفورمیشن وکتور بیانی حاوی ژن به چهار سویه مختلف باکتری E.coli برای تولید IGF-I دراستفاده شد و میزان تولید در این چهار سویه در زمان القا 240 دقیقه و IPTG با غلظت 0.4 میلی مولار بوسیله real time pcr مقایسه شد نتایج نشان داد که سویه SHuffle بیشترین میزان تولید نوترکیب را دارد از سویه Shuffle برای بررسی بیشترین میزان تولید در غلظت‌های مختلف IPTG و زمان‌های القا مختلف استفاده شد.سویه SHuffle در 13 حالت مختلف از نظر زمان القا و غلظت IPTG ازمایشی که بوسیله نرم افزار design expert طراحی شده بود قرار گرفت. پس از ان بوسیله Absolutye quantitative Real-time PCR بهینه ترین زمان القا و غلظت IPTG برای تولید IGF-I نوترکیب مشخص شد.یافته: بیشترین میزان بیان در سویهSHuffle در زمان القاء 240 دقیقه و غلظت 1 میلی‌مولار IPTG بدست آمد. نتیجه‌گیری: در محیط کشت SOC، غلظت متوسط IPTG و زمان القاء تأثیر معنی‌ داری بر بیا IGF-I دارند.