بررسی بقای سلول های سرطانی مثانه بواسطه مهار CTLA4

Abstract

سرطان مثانه یکی از انواع سرطان‌های سلول‌های پوششی است. سرطان مثانه دومین سرطان شایع دستگاه ادراری-تناسلی است. سن متوسط برای تشخیص سرطان مثانه ۶۵ سالگی است. میزان بروز سرطان مثانه در مردان بیشتر است. سرطان مثانه در سفیدپوستان بیش از سیاه‌پوستان مشاهده می‌شود. در ایران، مردان چهار برابر بیش‌تر از زنان به سرطان مثانه مبتلا می‌شوند. CTLA-4 مولکول های مهاری تنظیم کننده ی سیستم ایمنی هستند که با بیان در سطح سلول های سرطانی، در کاهش عملکرد سلول های ایمنی نقش دارند. در این مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصی، بیان ژن های CTLA-4 سرکوب شده و تاثیر این سرکوب همزمان بر رشد ، مهاجرت و آپوپتوز سلول های سرطانی ارزیابی گردد. مواد و روش ها: ابتدا رده سلولی مربوط به سرطان مثانه (EJ138) کشت داده شد . سپس siRNA اختصاصی ژن CTLA4 به رده ی سلولی مورد نظر ترانسفکت شد. جهت بررسی اثر سایتوتوکسیک siRNA منتقل شده تست MTT انجام گرفت. جهت بررسی این سرکوب ژنی بر میزان رشد و تکثیر سلول های سرطانی، ژن های دخیل در رشد ، تکثیر و متاستاز (CTLA-4,BAX,MMP9,MMP2,BCL-2,Ki67 ) به روش PCR-RT مورد بررسی قرار گرفت. پس از جمع آوری داده ها در نرم افزار Excell ، سازمان دهی داده ها انجام شد و سپس با استفاده از نرم افزار prism توزیع داده ها بررسی شده و برای توزیع نرمال از آزمون Test-T و برای داده های با توزیع غیر نرمال از آزمون whitney-Mann استفاده شد. یافته ها: در رده سلولی سرطانی مثانه افزایش معنی داری از بیان CTLA-4 را مشاهده کردیم. در مقایسه با گروه کنترل نتایج ما بطور معناداری فراوانی کاهش یافته ژن های دخیل در متاستاز و مهاجرت سلولی مثل MMP9,BCL-2, MMP2, و CTLA-4 بعد از اضافه کردن siRNA CTLA-4 را نشان داد. در حالی که ژن های دخیل در آپوپتوز مثل BAX افزایش معنی داری را نشان داد. همچنین داده های حاصل از MTT نشان داد که بعد از اضافه کردن CTLA-4 siRNA میزان رشد و تکثیر سلول های سرطانی کاهش یافت.