تولید سلولهای T مهندسی شده با گیرنده کایمری آنتی ژن CD19 و بررسی تاثیر دامین کمک تحریکی آنها در پاسخ این سلول ها به اینترلوکین

Abstract

مقدمه و هدف: سلول درمانی با گیرنده آنتی¬ژن کایمری (CAR) یک استراتژی امیدوارکننده برای درمان انواع مختلف سرطان¬ها است. برای بهینه¬سازی تولید سلول¬های CAR T cell از نظر هزینه و کیفیت، استفاده از سلول‌های aAPC پیشنهاد شده است. این سلول¬ها بیان¬کننده¬ی anti-CD3 هستند که سلول-های T را فعال می¬کنند. هدف از مهندسی این سلول تولید سلول¬های CAR T cell و ارزیابی تکثیر، ایمونوفنوتیپ و کشندگی آنهاست. از دیگر اهداف این تحقیق تولید دو نوع سلول CD19-CAR T cell نسل دوم است که در درمان برخی بدخیمی‌های خونی مورد استفاده قرار گرفته¬اند. همچنین در این مطالعه اثر IL-10 بر فعالیت¬های تکثیری و عملکردی سلول¬های T و CD19-CAR T cell مورد بررسی قرار گرفت. روش¬ها: برای تولید سلول‌های CD19-CAR T، سلول¬های T با آنتی‌بادی‌های anti-CD3/CD28 تحریک و با ویروس‌های ناقل CD19-CAR ترانسدیوس شدند. با تولید ویروس ناقل OKT3و ترانسدیوس K562، سلول‌ aAPC تولید شد. سلول‌های PBMCs و aAPC را برای ارزیابی حذف سلول‌های aAPC هم¬کشتی دادیم و زنده‌مانی آنها بررسی شد. سپس سلول‌های CAR T cell مشتق‌ از aAPC را برای بررسی تکثیر، نسبت CD4/CD8 و ویژگی¬های ایمونوفنوتیپی در مقایسه با روش استاندارد ارزیابی شدند. فعالیت ضد توموری سلول‌های CAR T را با هم¬کشتی با سلول‌ توموری انجام و قدرت کشندگی آنها با فلوسیتومتری و تست لوسیفراز ارزیابی شد. همچنین تاثیر IL-10 روی تکثیر سلول¬های T بررسی و اثر آن بر فعالیت ضد توموری سلول‌های CD19-CAR T با فلوسیتومتری و سنجش‌ مبتنی بر لوسیفراز انجام شد. نتایج: یافته¬ها نشان داد که سلول aAPC منجر به تولید سلول‌های CAR T cell با ظرفیت تکثیری بالایی می¬شود و در این روش تکثیر سلول‌های CD8+ T نسبت به روش استاندارد، به صورت معناداری بالاتر است (P-Value= 0.011). همچنین نتایج نشان داد که روش مبتنی بر aAPC بر فنوتیپ خستگی سلول‌های T یا CAR T cell تاثیری نمی¬گذارد. علاوه بر این، سلول‌های CAR T cell تولید شده با aAPC مشابه با روش استاندارد در مواجهه با سلول توموری نشانگرهای فعال‌سازی را به یک میزان بیان کردند ولی نسبت به روش استاندارد سطوح بالاتری از IFN-γ را آزاد کردند (P-Value= 0.0003). در این مطالعه سلول¬های CD19-CAR T cell نسل اول و دوم تولید و اثربخشی آنها در برابر سلول¬های توموری تایید شد. همچنین اثر IL-10 روی تکثیر سلول‌های T مثبت نشان داده شد و فعالیت ضد توموری سلول‌های CAR T cell نسل دوم حاوی دامین کمک تحریکی 4-1BB، به صورت معناداری در حضور IL-10 افزایش یافت (P-Value= 0.02). نتیجه¬گیری: در این مطالعه سلول aAPC تولیدی باعث فعال¬سازی و تکثیر سلول¬های T و CAR T cell، بویژه سلول¬های CD8+ T شد. همچنین اثر¬بخشی ضد توموری سلول¬های CAR T cell تولیدی با این روش تایید شد. تکثیر سلول¬های T فعال¬شده تحت تاثیر IL-10 افزایش یافت و اثربخشی ضد توموری IL-10 روی سلول¬های CAR Tتایید شد.