بررسی آپوپتوز واسترس اکسیداتیو در تخمدان منجمد شده پس از پیوند در داربست فیبرینی همراه سلول های اندوتلیال و ملاتونین در موش صحرایی

Abstract

ناباروری به عنوان یک مشکل بهداشت عمومی مطرح میشود که حدود 10- 15درصد زوجین را تحت تاثیر قرار میدهد.برای حفظ باروری در زنان جوان مبتلا به سرطان كه تحت شيمي درماني يا اشعه درماني قرار مـيگيرنـد و بـا خطـر از كـار افتـادن تخمـدانها و ناباروري مواجهند، روش¬های مختلفی مانند انجماد و پیوند بافت تخمدان مورد استفاده قرار میگیرد. انجماد بافت تخمدان به سه روش انجماد آهسته، فوق سریع و شیشه ایی انجام می¬شود یکی از مشکلاتی که طی انجماد ایجاد میشود این است که احتمال از بین رفتن فولیکولها افزایش می¬یابد. همچنین در طی عمل پیوند به دلیل تاخیر در واسکولوژنزیز و بروز هایپوسکی و ایسکمی تخمدان دچار آسیب میگردد. در این مطالعه برای کاهش این قبیل آسیب¬ها از ضدیخ متناسب، آنتی اکسیدان، ایجاد زخم در بستر پیوند و هیدروژل¬های زیستی استفاده شده است. هدف ما در این مطالعه بررسی اثر القائی داربست فیبرینی به همراه سلول¬های اندوتلیال و ملاتونین بر میزان بیان ژنهای آپوپتوتیک Bax) / Blc2وکاسپاز3) و آنتی اکسیدان¬های SOD),GPx ,MDA و TAC) در بافت تخمدان پیوندی منجمد شده است. مواد و روش : موش¬های بالغ 8-6 هفته ای تحت شرایط بیهوشی کنترل شده و به ازای 80 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن ماده بیهوشی کتامین و 10 میلی گرم بر کیلوگرم زایلازین به داخل صفاق تزریق شد. سپس در ناحیه کمری موش، شکافی در حد نیم سانتی متر ایجاد شده و تخمدان¬های عاری از چربی و مزانتر خارج گردید و در قطرات 100 میکرولیتری محیط کشتMEM –α حاوی %20 ,FBS قرار داده شد. انجماد بافت تخمدان با استفاده از روش انجماد شیشه ای انجام شد. برای ذوب کردن، تخمدان¬های منجمد شده در قطرات نزولی محلول‌های ساکارز 1، 5/0 و 25/0 مولار و DPBS قرار داده شدند. انکپسوله کردن تخمدان در هیدروژل فیبرینی همراه با سلول¬های اندوتلیال و ملاتونین انجام شد و در نهایت بافت تخمدانی به صورت زیر جلدی به همان موش¬ها به شکل اتوگرافت پیوند شدند. بعد از 14روز موش¬ها قربانی شدند و میزان آنتی اکسیدان¬های SOD),GPx,MDAو TAC)با تکنیک الایزا و میزان بیان ژن Bax) /Blc2وکاسپاز3) با استفاده از Real-time RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت.

نتایج : نتایج این تحقیق نشان داد که بیان ژن¬های Bax/Blc2وکاسپاز3 در گروه تخمدان منجمد پیوندی به طور معنی داری افزایش یافت(P<0.05) و در گروه¬های تخمدان منجمد انکپسوله شده کاهش یافت. این کاهش بیان ژن¬های Bax/Blc2وکاسپاز3 در گروه تخمدان انکپسوله شده با اسکافولد فیبرینی به همراه سلول¬های اندوتلیال و ملاتونین بیشتر از سایر گروه بندی¬ها بود و تفاوت معنی داری با گروه تخمدان منجمد پیوندی داشت (P<0.05). در گروه¬های دارای ملاتونین بیان ژن¬های Bax/Blc2 وکاسپاز3 در مقایسه با گروه دارای اسکافولد فیبرینی و اسکافولد فیبرینی به همراه سلول¬های اندوتلیال کمتر بود . در بیان BaxوBcl2 تفاوت معنی داری بین گروه دارای اسکافولد فیبرینی و اسکافولد فیبرینی به همراه سلول¬های اندوتلیال وجود نداشت. در واقع حضور سلول¬های اندوتلیال در کاهش بیان ژن هایBax قابل توجهی نداشت. همچنین نتایج این تحقیق نشان داد که سطح آنتی اکسیدان¬های SOD,GPx,MDAو TAC در گروه تخمدان منجمد پیوندی به طور معنی داری کاهش یافت(P<0.05). و در گروه¬های تخمدان منجمد انکپسوله شده افزایش یافت. این افزایش سطح آنتی اکسیدانی گروه تخمدان انکپسوله شده با اسکافولد فیبرینی به همراه سلول¬های اندوتلیال و ملاتونین بیشتر از سایر گروه بندی¬ها بود و تفاوت معنی داری با گروه تخمدان منجمد پیوندی داشت (P<0.05).