بررسی اثر siRNA در بیان آنکوپروتئین E6ویروس پاپیلومای HPV-16 بر تکثیر، تهاجم و مرگ سلولی در سلول¬های سرطانی CaSki

Abstract

عفونت پایدار با ویروس های پاپیلومای انسانی (HPV) پرخطر مانند hr-HPV-16 و hr-HPV-18 می تواند منجر به سرطان دهانه رحم، به عنوان چهارمین سرطان شایع در جهان شود. در مطالعه حاضر، ما تغییر بیان انکوژن E6 را توسط RNA تداخلی کوتاه اختصاصی E6 (siRNA)، در ترکیب با اکسالی پلاتین بررسی کردیم. مواد و روش ها: رده سلولی سرطان دهانه رحم، CaSki، از مرکز ملی ذخایر زیستی ایران تهیه شد و با E6-siRNA ترانسفکت شد، سپس با داروی شیمی درمانی اگزالیپلاتین تیمار گردید. ژن-های سلولی مانند p53، MMP9، Nanog و همچنین بیان کاسپازها با استفاده از qRT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. بررسی فعال شدن آپاپتور، فعالیت چرخه سلولی، و میزان بقای سلول ها به ترتیب با رنگ‌آمیزی Annexin V/PI، رنگ‌آمیزی DAPI و آزمون MTT ارزیابی گردید. همچنین توانایی خاصیت stemness و مهاجرت سلولی به ترتیب با استفاده از روش تشکیل کلونی و تست خراش (wound healing assay) تعیین گردید. نتایج: ترکیب داروی اکسالی پلاتین و siRNA باعث افزایش بیان مجدد ژن‌های دخیل در مسیر آپوپتوز وابسته بهp53 (افزایش آپوپتوز به میزان ۲/۴۴ درصد)، کاهش خاصیت stemness و توانایی مهاجرت سلولی در مقایسه با مونو‌تراپی بواسطه siRNA یا اکسالی پلاتین شد. نتایج ما نشان داد که ترکیب E6-siRNA و اکسالی پلاتین حساسیت سلول‌های سرطانی دهانه رحم را به داروی شیمی درمانی افزایش داده و به ترتیب منجر به کاهش میزان بقا، تکثیر، مهاجرت سلولی و متعاقبا افزایش میزان آپوپتوز می¬گردد. همچنین، درمان ترکیبی، افزایش القا توقف چرخه سلولی در مرحله sub-G1 و کاهش دوز موثر داروی شیمی درمانی نشان داد.