توسعه روش استخراج فاز جامدپخشی بر پایه جاذب‌های بیوپلیمری اصلاح شده و تلفیق آن با میکرواستخراج مایع-مایع پخشی به منظور استخراج کلاریترومایسین و مترونیدازول از نمونه‌های بیولوژیک و اندازه‌گیری آن‌ها با کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا
Abstract
مقدمه: آنتی بیوتیک‌ها یکی از شناخته شده ترین ترکیبات دارویی هستند که جهت پیشگیری و درمان بیماری‌های میکروبی یا عفونی استفاده می‌شود. آنالیز آنتی بیوتیک‌ها در نمونه‌های بیولوژیکی بدلیل غلظت‌های بسیار پایین آن‌ها به آسانی صورت نمی‌گیرد. از این‌رو استفاده از دستگاه‌های آنالیز پیشرفته به ویژه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا به همراه یک روش آماده‌سازی ضروری است.هدف: توسعه روش استخراج فاز جامد پخشی بر پایه جاذب‌های بیوپلیمری اصلاح شده و تلفیق آن با میکرواستخراج مایع-مایع پخشی به منظور استخراج کلاریترومایسین و مترونیدازول از نمونه‌های بیولوژیکی و اندازه‌گیری آن‌ها با کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا.
روش کار: در این مطالعه به منظور استخراج آنتی بیوتیک‌های مورد مطالعه از پلاسما روش استخراج فاز جامد پخشی بر پایه جاذب‌های بیوپلیمری استفاده شده است. 15میلی‌گرم از جاذب تهیه شده به داخل 5 میلی‌لیتر از محلول آزمایشی حاوی مخلوط آنتی بیوتیک‌ها افزوده شده و مخلوط حاصل به مدت 2 دقیقه شدیداً بهم زده شد. پس از سانتریفوژ و حذف فاز رویی، 5/0 میلی‌لیتر از حلال واجذب کننده بر روی جاذب افزوده شد و شویش آنالیت‌های جذب شده به سطح جاذب به کمک اولتراسونیک به مدت 1 دقیقه انجام شد. در ادامه جهت دستیابی به فاکتور تغلیظ بالا، حلال حاوی آنالیت‌ها با 50 میکرولیتر حلال استخراج‌کننده مخلوط شده و روش DLLME برای استخراج آنالیت‌ها از حلال مرحله قبل بکار گرفته شد. پس از سانتریفوژ، فاز ته‌نشین شده تبخیر شد و بعد از انحلال مجدد در 20 میکرولیتر از فاز متحرک، جهت آنالیز کمی به دستگاه کروماتوگرافی مایع تزریق شد.
نتایج: تحت شرایط بهینه استخراج، مقادیر حد تشخیص و حد کمی سازی برای مترونیدازول و کلاریترومایسین به ترتیب 1/2 و 9/1 نانوگرم بر میلی‌لیتر و 0/7 و3/6 نانوگرم بر میلی‌لیتر، راندمان استخراج برای مترونیدازول و کلاریترومایسین به ترتیب برابر 79 و 89 درصد و انحراف استاندارد نسبی زیر 3/6 % می‌باشد.نتیجه گیری: آنالیز نمونه‌ها با روش پیشنهادی نشان داده که غلظت مترونیدازول 263 و 203 نانوگرم بر میلی‌لیتر و غلظت کلاریترومایسین 183 و 169 نانوگرم بر میلی‌لیتر بوده است. حدود تشخیص و کمی پایین روش پیشنهادی امکان آنالیز مقادیر کم داروهای مورد مطالعه در نمونه‌های بیولوژیکی را فراهم می‌نماید.