بررسی تغییرات متیلاسیون و بیان ژن RASSF2 در بافت توموری و حاشیه تومور بیماران مبتلا به سرطان ریه

Abstract

انواع مختلف بدخیمی ها امروزه به عنوان یکی از مهمترین علل مرگ و میر در دنیا شناخته می شوند در این بین سرطان ریه به عنوان شایعترین سرطان در بین هر دو جنس مذکر و مونث می باشد و با توجه به بیولوژی و پاتوژنز این بیماری دارای بالاترین مرگ و میر در بین انواع سرطان ها است . یکی از مهمترین تغییرات شناخته شده در روند سرطانها به خصوص سرطان ریه تغییرات اپی ژنتیکی به خصوص در سطح متیلاسیون DNA است که با تغییر بیان ژنهای مختلف به خصوص تومورساپرسورها و انکوژن‌ها باعث پیشرفت این بیماری می شود. خانواده پروتیینی RAS از جمله شناخته شده ترین انکوژن‌ها هستند این GTPase ها نقش کلیدی در ایجاد و پیشرفت سرطان دارند. از جمله مهمترین سرکوب کننده های خانواده Ras GTPase که به واسطه عملکرد خود در گروه ژنهای سرکوبگر تومور قرار می گیرند . خانواده پروتنینی RASSF (Ras Association Domain Family Member) می باشد این خانواده پروتیینی دارای 10 عضو می باشد که RASSF2 یکی از شناخته شده ترین اعضا این خانواده است . مطالعات Invitro پیشتر نقش این ژن را در مهار رشد سلولی و القا آپوپتوز را به اثبات رسانده است . بر اساس شواهد در اغلب تومورها ما شاهد کاهش یا از دست رفتن عملکرد RASSF2 هستیم .در این مطالعه میزان بیان این ژن و متیلاسیون آن در بیماران مبتلا به سرطان ریه و رابطه آنها با متغیرهای بالینی بیماران مورد بررسی قرار گرفت . روش انجام کار: در این پژوهش75 عدد نمونه از بافت تومور و 75 عدد نمونه حاشیه تومور بیماران مبتلا به سرطان ریه از نوع NSCLC از همان بیماران جمع آوری شده سپس برای ارزیابی بیان ژنها ابتدا RNA از بافتها استخراج ، و پس از سنتز cDNA از آن برای بررسی تغییرات بیان ژن RASSF2 بوسیله Real Time PCR استفاده گردید. در قسمت دوم بررسی نیز ابتدا DNA ها استخراج و بعد از تیمار bisulfite و میزان متیلاسیون ژن مورد بررسی با روش نیمه کمی MS-HRM انجام گرفت. در این بررسی در تمام آزمونهای آماری0.05 pvalue< به عنوان سطح معنی داری در نظر گرفته شد. نتایج: نتایج بدست آمده مشخص کرده است افزایش معنی دار متیلاسیون در ناحیه پروموتور ژن RASSF2 در نمونه های توموری نسبت به نمونه های سالم و به طبع آن کاهش معنی دار بیان این ژن در نمونه های توموری نسبت به نمونه های مارژین را نشان می دهد. همچنین تغییرات بیان و متیلاسیون این ژن با برخی ویژگی های پاتولوژیک بیماران مثل متاستاز نیز دارای ارتباط است.