مطالعه اثر بخشی سرکوب بیان ژن PD-L1 بر آپوپتوز رده ی سلولی سرطان کبد
چکیده
امروزه در درمان سرطان کبد، مهار ايمیون چک پوينتها بسیار مورد توجه قرارگرفته است. PD-L1 مولكول مهاری تنظیم کننده ی سیستم ايمني است که با بیان در سطح سلولهای سرطاني، در کاهش عملكرد سلولهای ايمني نقش دارد. در اين مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصي، بیان ژن PD-L1 سرکوب شده و تأثیر اين سرکوب همزمان بر رشد، مهاجرت و آپوپتوز سلوشهای سرطاني کبد ارزيابي گردد.
مواد و روش ها:
بدين منظور رده سلولي کبدی از نظر بیان PD-L1بررسي شده و سپس از طريق siRNA اختصاصي ژن PD-L1 با روش الكتروپوريشن به رده ی سلولي مناسب انتقال يافت و با تست MTT اثر سايتوتوکسیک اين سرکوب بررسي گشت. با ارزيابي فلوسايتومتری میزان آپوپتوز و تغییرات رخه سلولي بررسي شد. مهاجرت رده ی سلولي با تست wound healing assay بررسي گرديد و ژنهای دخیل در القای آپوپتوز و مهاجرت سلولي نیز مورد بررسي قرار گرفت.
نتایج
به دنبال سرکوب بیان ژن PD-L1 میزان تكثیر سلولهای سرطاني کاهش يافت. از طرفي میزان آپوپتوز سلولهای ترانسفكت شده نیز القا شد. از طرفي اين سرکوب منجر به کاهش توانايي مهاجرت و توقف چرخه ی سلولي در فاز G1 گرديد. میزان بیان ژن BAX افزايش ، ژن BCL-2 کاهش ، Cas9 افزايش و ژن C-Myc کاهش داشت.