بهینه سازی شرایط پگیلاسیون داروی اینترفرون بتا-1-آ نوترکیب

Abstract

مقدمه: افزایش حجم پروتئین ها جهت کاهش فیلتراسیون کلیوی آنها برای افزایش نیمه عمر دارو یکی از روش های کاهش مقدار داروی مصرفی توسط بیماران می باشد. در این مطالعه بهینه سازی شرایط پگیلاسیون داروی اینترفرون بتا 1-آ با وزن مولکولی kDa 22.5 در ناحیه آمین انتهایی (N-terminal) مورد بررسی قرار گرفت. اهداف: بهینه سازی شرایط دمایی و زمان ، pH و نسبت مولی پلیمر به پروتئین واکنش پگیلاسیون. روش کار: پگیلاسیون اینترفرون بتا 1-آ در ناحیهN-ترمینال توسط PEG-aldehyde 20 کیلو دالتون در نسبت مولی پلیمر به پروتئین 1، 2، 3، 4، 5، 6 و 10 و در دمای 10، 15، 25 درجه سانتی گراد و در pH 4, 4.5, 5, 5.5مورد بررسی قرار گرفت. نمونه های 0، 4، 6، 8، 10 و 24 ساعت بعد شروع واکنش توسط SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: پگیلاسیون اینترفرون بتا 1-آ در ناحیه-N ترمینال توسط PEG 20 kDa Methoxy Polyethylene Glycol Aldehyde با موفقیت انجام شد. نمونه های حاصل از واکنش‌های پگیلاسیون به روش الکتروفورز بررسی و با رنگ آمیزی نقره نیترات انجام گرفت. شرایط بهینه برای پگیلاسیون اینترفرون بتا 1-آ با توجه به نتایج حاصل شامل نسبت مولی پلیمر به پروتئین برابر 4 در pH برابر 4 و دمای 15 درجه سانتی گراد به مدت 10 ساعت انکوباسیون است. نتیجه گیری: پلیمر پلی اتیلن گلیکول با گروه فعال آلدهید و با وزن مولکولی 20 کیلودالتون برای پگیلاسیون اینترفرون بتا 1-آ در ناحیه آمین انتهایی در شرایط pH اسیدی مناسب بوده و با توجه به نتایج حاصل، انتخاب نسبت اپتیمم بین دمای واکنش و نسبت مولی پلیمر به پروتئین به طوری که بازده واکنش از نظر اقتصادی مقرون به صرفه باشد پیشنهاد می شود.