بررسی تنوع ژنتیکی سرین ریچ هیستیدین پروتئاز در مبتلایان علامت دار به دیسانتری آمیبیازیس
Abstract
آمیبیازیس یک عفونت روده ای در انسان است که توسط تک یاخته انتامبا هیستولیتیکا (عامل اسهال خونی آمیبی) ایجاد می شود. در 90 درصد موارد بدون علامت است و در 10درصد موارد طیفی از سندروم های بالینی از دیسانتری تا کولیت شدید ، آبسه کبدی و حتی پریتونیت مشاهده می شود. آنتي ژنهاي سطحي تروفوزوئيت انتامبا هيسـتوليتيكا هماننـد پـروتئين غنـي از سـرين از عوامـل اصـلي در بـروز بيمـاري آميبيازيس تهاجمی بوده و در كيتهاي تشخيصي الايزا از پروتئين نوتركيب آنهـا جهــت تشــخيص آميبيــازيس و تشــخيص افتراقــي انتامبــا هيستوليتيكا از ديگر گونه ها استفاده ميگردد. لذا مطالعه حاضر با هدف بررسی تنوع ژنتیکی سرین ریچ هیستیدین پروتئاز انتاموبا هیستولیتیکا در مبتلایان به آمیبیازیس در ایران انجام گرفت.
مواد و روش بررسی: در مطالعه مقطعی حاضر پس از کسب کداخلاق و رضایت از شرکت کننده گان 500 نمونه مدفوع از مراجعه کنندگان با اختلالات گوارشی از شهرستان سقز انجام جمع آوری گردید. با استفاده از روس های مستقیم میکروسکوپی، رنگ آمیزی تری کروم و با هدف قرار دادن ژن 18s RNA گونه انتامبا هیستولیتیکا شناسایی شد. در ادامه بمنظور تعیین تیپ ژن سرین ریچ هیستیدین پروتئاز انتامبا هیستولیتیکا، تکنیک Nested-PCR انجام پذیرفت و سپس با روش PCR –RFLP با استفاده از آنزیم ALU1 مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. در ادامه محصولات مرحله دوم Nested-PCR جهت بررسی تنوع ژنتیکی مستقیما تعیین توالی گردید.
نتایج: در مطالعه حاضر بیشترین گروه سنی از 10 مورد دارای انتامبا هیستولیتیکا رنج 11 تا 20 ساله و همچنین میزان فراوانی انگل انتامبا هیستولیتیکا با 67% در مردان و 33% در زنان و شیوع 2% شناسایی شد. با توجه به آناليز AMOVA Analysis of Molecular Variance)) مقادير نسبتاً بالاي تنوع هاپلوتايپي (تنوع ژنتیکی) (Hd: 0.762) انتامبا هيستولتيكا شامل 2 هاپلوتایپ جدید با استفاده از نرم افزار DNAsp شناسایی شد. نتایج همردیف سازی (الاینمنت) توالی های ادیت شده نشان داد جابجایی کدونی قابل توجهی در نمونه های اسهال خونی (SREHP4-7*) اتفاق افتاده است. درحالیکه در نمونه های اسهالی موکوییدی و اسهال ابکی (SREHP1-3*) جابجایی کدونی قابل توجهی مشاهده نشد. در این مطالعه تمام ایزوله ها به دو قطعه 152 و 300 جفت باز برش داده شدند که موید قطعی تیپ 5 می باشد