بررسی تغییرات متیلاسیون و بیان ژن RASSF2 در بافت توموری و حاشیه تومور بیماران مبتلا به سرطان پستان

Abstract

سرطان امروزه پس از بیماری های قلبی و عروقی به عنوان دومین عامل مرگ و میر شناخته می شود(22%)، بروز آن به عواملی مانند سن، زمینه ژنتیکی و جنسیت بستگی دارد. بر اساس آمار منتشرشده سرطان پستان یکی از شایعترین سرطان ها در بین زنان است. بطوریکه طبق آمار سازمان بهداشت جهانی از هر 8 تا 10 زن ، 1 نفر مبتلا به سرطان سینه می باشد. RASSF2 یکی از 10 عضو RASSF (خانواده دامنه انجمن Ras) است. از طریق تعامل با Ras GTPase، این پروتئین ها فرآیندهای سلولی متنوعی از جمله نقل و انتقال غشاء، آپوپتوز، مهاجرت و تکثیر را تنظیم می کنند. RASSFها بر اساس توانایی آنها در مهار پروتوانکوژن RAS به عنوان سرکوبگرهای تومور طبقه بندی می شوند. مانند سایر اعضای خانواده، RASSF2 می تواند رشد سلولی را مهار کرده و آپوپتوز را القا کند. بر این اساس، از دست دادن بیان RASSF2 در تومورها و رده های سلولی سرطانی مختلف مشاهده شده است و چنین پدیده هایی اغلب با هیپرمتیلاسیون پروموتر RASSF2 و پیش آگهی ضعیف برای بیماران همراه است. در این مطالعه میزان بیان این ژن و متیلاسیون آن در بیماران مبتلا به سرطان پستان و رابطه آنها با متغیرهای سن، استعمال دخانیات، سابقه خانوادگی، Stage و متاستاز بررسی شده است. روش انجام کار: در این پژوهش 75 عدد نمونه از بافت تومور و 75 عدد نمونه حاشیه تومور بیماران سرطانی مورد بررسی قرار گرفت. پس از استخراج RNA (ترایزول) از بافتها، سنتز cDNA انجام گرفت و از آن برای ارزیابی تغییرات بیان ژن RASSF2 بوسیله Real Time PCR استفاده گردید. همچنین، استخراج DNA از نمونه های بافتی انجام گرفت و بررسی الگوی متیلاسیون نواحی پروموتری RASSF2 با استفاده از تیمار bisulfite و تکنیک MS-HRM (methylation sensitive high resolution melt analysis) انجام گرفت. آنالیز آماری برای بررسی تغییرات بیان و متیلاسیون ژن RASSF2 و اثرات آنها بر روی مشخصات کلینیکال بیماران انجام گرفت و pvalue<0.05 به عنوان سطح معنی داری در نظر گرفته شد. با استفاده از روش آماری ROC curve analysis پتانسیل بیومارکری بیان و متیلاسیون ژن RASSF2 به عنوان فاکتور تشخیص زورس سرطان سینه مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: نتایج بدست آمده مشخص کرده است ارتباط معنادار بین بروز ژن در بافت سرطانی و بافت سالم وجود دارد بطوریکه بیان ژن RASSF2 در بافت های سرطان پستان از بافت های حاشیه تومور کمتر است. همچنین متیلاسیون در بافت های سرطان پستان به وضوح بالاتر از بافت های سالم است.