بررسی اثر مهار فعالیت تلومرازی بر مسیر میتوکندریایی آپوپتوز در سلولهای بنیادی لوکمیای حاد میلوئیدی
چکیده
لوکمیای حاد میلوئیدی از جمله سرطان¬های خونی کشنده و تهاجمی است که توسط جمعیت محدودی از سلول¬های بنیادی لوکمیایی (Leukemia Stem Cells) ایجاد می¬شود. فعالیت تلومراز یکی از عوامل ایجاد خودنوزایی نامحدود در سلول¬های بنیادی لوکمیا است. علاوه بر عملکرد تلومراز در حفظ و افزایش طول تلومر، نقش تلومراز (به ویژه زیرواحد hTERT آن) در مهار مسیرهای خارجی و داخلی آپوپتوز نشان داده شده است. از این روی، استفاده از روش¬هایی که باعث مهار فعالیت تلومراز شود به کنترل تکثیر و خودنوزایی سلول¬های بنیادی سرطانی کمک می¬کند. هدف اصلی این طرح، بررسی کنترل فعالیت تلومرازی بر مسیرهای اصلی فعالیت سلولی در سلول¬های بنیادی لوکمیا در جهت کاهش پیشرفت سرطان می باشد.
مواد و روش¬ها: سلول¬های با خلوص بالای CD34+ و CD34- پس از انجام تکنیک فایکول و MACS از رده سلولی KG-1a و خون بیماران مبتلا به AML جدا و به منظور به دست آوردن IC50 با استفاده از تکنیک MTT assay با غلظت¬های مختلف مهارکننده تلومراز BIBR1532 انکوبه شدند. پس از تعیین IC50، میزان آپوپتوز، تکثیر، طول تلومر و میزان بیان ژن¬ها و پروتئین¬های دخیل در آپوپتوز اندازه¬گیری شد.
نتایج: نتایج ما نشان داد که مهار تلومراز با مقادیر IC50 (83.5، 33.2، 54.3 و 24.6 میکرومولار) باعث مهار تکثیر و القای آپوپتوز در سلول¬های CD34+ و CD34- می شود. با این حال، مهار تلومراز به صورت کوتاه مدت (48 ساعت) تاثیر معناداری بر طول تلومر نداشت. در این مطالعه همچنین نشان داده شد که مهار تلومراز باعث کاهش بیان ژن¬های hTERT و آنتی آپوپتوتیک Bcl-2 و Bcl-xl و افزایش بیان ژن¬های P53 و پروآپوپتوتیک Bax، Bad و Bid و پروتئین¬های کاسپاز 3، 8، 9 و سیتوکروم C می¬شود.