بررسی اثر اگزوزوم های گیاهی بارگیری شده با بربرین بر روی رده ی لوسمی لنفوبلاستیک حاد (T-ALL Jurkat)

Abstract

مطالعه حاضر در درجه اول به فرمولاسیون زیستی نانوذرات مشتق از انگور (GDN) به عنوان حامل برای بربرین و بررسی اینکه آیا GDN ها فعالیت ضد سرطانی بربرین را در برابر لوسمی لنفوبلاستیک حاد (ALL) القا می کند، می پردازد. مواد و روش ها: نانوذرات انگور با مراحل اولتراسانتریفیوژ افتراقی جدا و خالص شدند. ساختار، اندازه و پتانسیل زتا نانوذرات با استفاده از میکروسکوپ الکترونی روبشی (SEM) و پراکندگی نور دینامیکی (DLS) مورد بررسی قرار گرفت. بربرین از طریق روش غیرفعال درون نانوذرات انگور ها بارگذاری شد و کارایی بارگیری دارو، آزادسازی دارو در محیط آزمایشگاهی مورد ارزیابی قرار گرفت. از روش MTT برای تعیین سمیت سلولی GDN های بارگیری شده با بربرین و بربرین آزاد در رده سلولی Jurkat T-ALL استفاده شد. پس از تیمار سلول ها با دو گروه درمانی GDN های بارگذاری شده با بربرین و بربرین آزاد در دو غلظت انتخابی 30 و 60 میکرو مولار ، بیان ژن کاسپاز-3، 8، 9، BAX، و BCL-2 توسط qRT-PCR اندازه گیری شد. علاوه بر این، فلوسایتومتری برای تجزیه و تحلیل آپوپتوز انجام شد. یافته ها: تصاویر SEM و داده های DLS نشان داد که GDN ها کره هایی با اندازه متوسط 278 نانومتر و شاخص پراکندگی (PDI) 0.4 هستند. همچنین راندمان کپسولاسیون 87 درصد محاسبه شد. در طی یک دوره 72 ساعته، تست رهایش دارو نشان دهنده ی انتشار کندتر و پایدارتر بربرین بود. داده‌های به‌دست‌آمده از روش MTT نشان داد که GDNهای بارگذاری‌شده با بربرین در مقایسه با محلول بربرین آزاد، اثر سیتوتوکسیک بالاتری دارند. نتایج فلوسایتومتری نشان داد که GDN های بارگذاری شده با بربرین به طور قابل توجهی باعث آپوپتوز در سلول های لوسمیک به صورت وابسته به دوز و زمان می شوند و همچنین فعالیت ضد آپوپتوز بالاتری نسبت به بربرین آزاد نشان می دهند. علاوه بر این، تجزیه و تحلیل بیان ژن درگیر در آپوپتوز و بقای سلول نشان داد که GDN های بارگذاری شده با بربرین بیان mRNA ژن های کاسپاز 3، 8، 9 و Bax را به میزان زیادی افزایش دادند در حالی که بیان پروتئین ضد آپوپتوز BCL-2 را کاهش دادند.