بررسی اثر سرکوب همزمان بیان ژن های VISTA و CTLA-4 بر مهار رشد و مهاجرت رده ی سلولی سرطان سینه

Abstract

امروزه در درمان سرطان سینه، مهار ایمیون چک پوینت ها بسیار مورد توجه قرار گرفته است. CTLA-4 و VISTA مولکول های مهاری تنظیم کننده ی سیستم ایمنی هستند که با بیان در سطح سلول های سرطانی، در کاهش عملکرد سلول های ایمنی نقش دارند. در این مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصی، بیان ژن های VISTA و CTLA-4 سرکوب شده و تاثیر این سرکوب همزمان بر رشد، مهاجرت و آپوپتوز سلول های سرطانی ارزیابی گردد. مواد و روش ها بدین منظور رده های سلولی MCF-7 و SKBR3 سرطان سینه از نظر بیان VISTA و CTLA-4 بررسی شده و سپس از طریق siRNA اختصاصی ژن های VISTA و CTLA-4 با روش الکتروپوریشن به رده ی سلولی مناسب انتقال یافت و با تست MTT اثر سایتوتوکسیک این سرکوب بررسی گشت. با ارزیابی فلوسایتومتری میزان آپوپتوز و تغییرات چرخه سلولی بررسی شد. مهاجرت رده ی سلولی سرطان سینه با تست خراش بررسی گردید و ژن های دخیل در القای آپوپتوز و مهاجرت سلولی نیز مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت به منظور بررسی اثر این سرکوب، گروه های مورد نظر با لنفوسیت های T به شکل همزمان کشت داده شدند. نتایج رده ی سلولی MCF-7 جهت مطالعه انتخاب شد. به دنبال سرکوب همزمان بیان ژن هایCTLA-4 و VISTA میزان تکثیر سلول های سرطانی MCF-7 کاهش یافت. از طرفی میزان آپوپتوز سلول های ترانسفکت شده نیز القا شد. از طرفی این سرکوب همزمان منجر به کاهش توانایی مهاجرت و توقف چرخه ی سلولی در فاز sub-G1 گردید. همچنین بررسی ژن های مرتبط به متاستاز نیز کاهش یافت ولی تغییر بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز محسوس نبود. میزان بیان سایتوکاین های التهابی IFN-γ ، IL-2 و TNF-α افزایش و میزان سایتوکاین های ضد التهابیIL-10 و TGF-β در لنفوسیت های T حاصل از کشت همزمان کاهش داشت.