کلون سازی ژن های mcr-1 و mcr-2 در سویه اشریشیا کلی DH5-α جهت ارزیابی مقاومت به کولیستین ، تغییرات الگوی پروتئین و پایداری پلاسمیدی آن
چکیده
ژن های پلاسمیدی mcr-1 و mcr-2 از دسته ژن های مقاوم به آنتی بیوتیک کولیستین محسوب می شوند اما سویه اشریشیا کلی DH5-α فاقد این نوع پلاسمیدها بوده در نتیجه به آنتی بیوتیک کولیستین حساس می باشد. در این مطالعه با استفاده از عمل ترانسفورماسیون انتقال پلاسمید ها به سویه اشریشیا کلی DH5-α صورت گرفت و تغییرات به وجود آمده در پروتئین های باکتری میزبان به واسطه دریافت ژن های پلاسمیدی مقاوم به آنتی بیوتیک کولیستین ، تغییراتی در پروتئین های ساختاری و عملکردی و میزان پایداری پلاسمیدها در سویه اشریشیا کلی DH5- aترانسفورم شده مورد پژوهش و بررسی قرار گرفته شد.
روش کار: ابتدا از سویه های استاندارد اشریشیا کلی حاوی ژن های پلاسمیدی mcr-1 و mcr-2 استخراج پلاسمید صورت گرفت سپس عمل ترانسفورماسیون یا انتقال پلاسمید به روش کامپیتنت سل انجام گردید و پایداری پلاسمید تحت شرایط مختلف و با ساب کالچرهای متوالی ارزیابی شد و برای بررسی پپتید های آنها با استفاده از روش طیف‌سنجی جرمی تکنیک جذب و یونش لیزری با ماتریکس MALDI-TOF MS انجام گردید.
یافته ها: نتایج حاصل از انجام عمل ترانسفورماسیون و نتایج پروتئومیکی نشان داد که مقاومت به آنتی بیوتیک کولیستین به واسطه دریافت و بیان ژن های مقاوم به کولیستین و تغییر در پپتیدهای سویه تیمار شده ایجاد شد