Frequency of blaPER-1 in clinical isolates of Acinetobacter bumannii and its assocition with quorum sensing, biofilm production and virulence factors in Tabriz and typing of isolates by RAPD-PCR

Abstract

Acinetobacter baumannii is known as the main pathogenic organism, especially for nosocomial infections. Multi-drug resistance and the presence of different virulence factors are recognized as causes of the organism's survival and the infection’s risk. The purpose of this study was to evaluate the frequency of blaPER-1 in clinical isolates of A.bumannii and its association with quorum sensing (luxI, luxR), biofilm production (pgaB, bap) and virulence factors (pld, epsA, ptk) in Tabriz and typing of isolates by RAPD-PCR Method and materials: In this study, 70 A.baumannii isolates were collected from three hospitals located in the Northwest of Iran. The antimicrobial susceptibility of these isolates was determined by micro broth dilution and disk diffusion methods. Production of biofilm, gelatinase, proteolytic, and hemolytic activities of the isolates was also assessed. The frequencies of bap, pgaB, epsA, pld, ptk, luxR, luxI, and blaPER-1 genes were investigated by polymerase chain reaction (PCR). Furthermore, molecular typing of the isolates was performed using random amplified polymorphic DNA (RAPD-PCR). Results: Six of the 70 study isolates were found to be resistant to all the tested antibiotics. Nine (12.8%) of the isolates were found to be resistant to colistin. 88.6%, 38.5%, 45.7%, and 15.5% of the isolates were positive for biofilm production, gelatinase, protease, and hemolysis, respectively. The frequency of the genes were as follows: pld 100%, epsA 91.9%, luxI 85.7%, ptk 80%, luxR 75.7%, bap 72.9%, pgaB 98.6% and blaPER-1 64.2%. Based on the RAPD patterns obtained, the 70 isolates in this study clustered into twelve major genotypes. مواد و روش کار در این مطالعه هفتاد ایزوله آسینتوباکتر بومانی از سه بیمارستان واقع در شمال غرب ایران جمع آوری شد. الگوي مقاومت آنتي بيوتيكي ایزوله ها با روش های دیسک دیفیوژن آگار و میکرو براث دایلوشن تعیین شد. تولید بیوفیلم، ژلاتیناز، فعالیت های پروتئاز و همولیزین ایزوله ها نیز مورد ارزیابی قرار گرفت. فراوانی ژن‌های bap، pgaB، epsA، pld، ptk، luxR، luxI و blaPER-1 توسط واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) بررسی شد. علاوه بر این، تایپ مولکولی ایزوله ها با استفاده از DNA پلی مورفیک تکثیر شده تصادفی(RAPD-PCR) انجام شد. نتایج شش ایزوله از 70 ایزوله مورد مطالعه به همه آنتی بیوتیک های آزمایش شده مقاوم بودند. 9 (8/12%) از ایزوله ها به کولیستین مقاوم بودند. 6/88%، 7/45%، 5/38% و 5/15% از ایزوله ها به ترتیب از نظر تولید بیوفیلم، پروتئاز ژلاتیناز، و همولیزین مثبت بودند. فراوانی ژن ها به شرح زیر بود: pld 100%، epsA 9/91%، luxI 7/85%، ptk 80%، luxR 7/75%، bap 9/72%، pgaB 6/98% و blaPER-1 2/64%. بر اساس الگوهای RAPD به دست آمده، 70 ایزوله در این مطالعه در دوازده ژنوتیپ اصلی قرار گرفتند.