بررسی اثر RNA کوچک مداخله گر (siRNA) ضد HPV E5 بر مهار بیان این آنکوژن و ژن گیرنده ی فاکتور رشد اپیدرمال
چکیده
هدف اصلی انجام این مطالعه بررسی مهار HPV E5 توسط siRNA بر بیان ژن EGFR در سلول های CaSki (سرطان دهانه ی رحم) بود.
مواد و روش ها: سلول های CaSki که شامل ژنوم اینتگره شده ی HPV-16 و رونوشت های E5 می باشد از مرکز ملی ذخایر زیستی ایران تهیه شد همچنین siRNA مورد استفاده توسط شرکت Bioneer کره ی جنوبی سنتز و ارسال گرید. به منظور بررسی خاصیت سایتوتوکسیسیتی و ضد رشدی HPV E5 siRNA بر روی سلول های سرطان دهانه ی رحم از تکنیک MTT استفاده گردید. عملکرد مهاری siRNA بر روی بیان HPV E5 همچنان با استفاده از روش qRT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. بررسی فعال شدن آپاپتوز و فعالیت چرخه ی سلولی در سلول های ترانسفکت شده با siRNA از روش فلوسایتومتری و به ترتیب از رنگ آمیزی Annexin V-FITC/PI و DAPI استفاده شد.
نتایج: پس از انجام ترانسفکشن سلول های با HPV E5 siRNA سطح بیان E5 mRNA تا حد بسیار زیاد و معنا داری کاهش پیدا کرد که این مسئله نشانگر عملکرد بهینه ی siRNA استفاده شده در این مطالعه بود. همچنین استفاده از این siRNA و مهار بیان HPV E5 باعث توقف معنادار سلول ها در مرحله ی ورود به چرخه ی سلولی یا sub-G1 شد. بعلاوه این مهار باعث کاهش معنادار در بیان ژن PTGS2 و BCL2 و افزایش بیان ژن های BAX، HPV-16 E6 و HPV-16 E7 شد. ولیکن این مهار بیان هیچ گونه تغییر معناداری در بیان ژن EGFR ایجاد نکرد. همچنین نتایج تست آپاپتوز نشان داد که مقدار معنا دار و متناسب با نتایج آنالیز چرخه ی سلولی از سلول ها وارد فاز آپاپتوتیک می شوند.