بررسی اثر مهار ژن HSP27 با siRNA کمپلکس شده با اگزوزوم بر رشد و تمایز سلول¬های نوروبلاستومای انسانی رده SH-SY5Y

Abstract

پروتئین¬های شوک حرارتی در تنظیم فعالیت سلول¬های مختلف در پاسخ به انواع تحریکات شرکت می¬کنند. تنظیم پروتئین¬های شوک حرارتی با استفاده از استراتژی¬های مختلف، مورد توجه واقع شده است. به¬خاطر وجود مسائلی مانند سمیت و ایمنوژنیستی روش¬های رایج انتقال مواد کاملاً مورد تأیید نیستند. اگزوزوم¬ها به-عنوان بیوشاتل¬هایی برای تحویل بیومولکول¬های مختلف به داخل سلول¬ها مورد توجه قرار گرفته¬اند. در این مطالعه از اگزوزوم¬های کمپلکس شده با siRNA ضد HSP27 برای مهار HSP27 در رده¬ی سلولی نوروبلاستومای انسانی SH-SY5Y استفاده شد و تمایز آن¬ها به سلول¬های شبه نورونی مورد بررسی قرار گرفت. روش کار: اگزوزوم¬ها استخراج شده و به¬وسیله¬ی SEM و پروتئین CD63، مارکر سطحی اگزوزوم، با متد الایزا شناسایی شده، سپس با siRNA-HSP27 کمپلکس شدند. سلول¬های نوروبلاستوما به¬مدت 24 ساعت با این اگزوزوم¬های ترانسفکت شده انکوبه شدند. میزان ترانسفکشن با متد ایمنوفلورسنس و زنده¬مانی و تکثیر سلولی با استفاده از روش MTT و سنجش BrdU، توانایی سلول¬ها برای تشکیل کلنی با روش کلونوژنیک اسی، پتانسیل سلولی برای بیان NeuN، مارکر نورون بالغ، با روش فلوسایتومتری مورد آنالیز و مطالعه قرار گرفتند. یافته¬ها: SEM اندازه و مورفولوژی نانوذرات را نشان داد و الایزا سطوح بالایی از مارکر پروتئینی CD63 را بعد از غنی¬سازی اگزوزوم شناسایی کرد. تصویربرداری ایمنوفلورسنس میزان ترانسفکت مناسب سلولی را در سلول¬های تیمار شده با اگزوزوم کمپلکس شده با siRNA-HSP27 نشان داد. زنده¬مانی و تکثیر سلولی در این گروه در مقایسه با سلول¬های دریافت¬کننده¬ی اگزوزوم خالی، کاهش یافت (p<0.05). با مهار HSP27 فعالیت کلونوژنیک سلول¬ها کاهش یافت. آنالیز¬های فلوسایتومتری نشان دادند که مهار HSP27 میزان NeuN، بلوغ سلول¬های SH-SY5Y را، در مقایسه با گروه کنترل کاهش داد (p<0.05).