بررسی اثر روتین بر بیان ژنهای Bax و Bcl2 در سلولهای سرطان دهان (HN5)
Abstract
مقدمه: با توجه به این که عوارض داروهای شیمیایی جهت شیمی درمانی در بیماران سرطانی چشمگیر می باشد و برخی مواد گیاهی همانند روتین اثرات ضد سرطانی دارند، روتین آبگریز می باشد و سنتز نانوذرات باعث بهتر شدن فراهمی زیستی مواد آبگریز می شود، بر آن شدیم که اثر این ماده ضد سرطانی را روی سلولهای سرطان دهان HN5 بررسی کنیم و در این مطالعه اثر روتین و نانوروتین را بر بیان ژن های Bax و Bcl2 بررسی کردیم.
روش کار و مواد: در این مطالعه نانوذرات روتین به روش فراصوت و تبخیر حلال تهیه و با روش های ارزیابی نانومواد (شامل اندازه ذره ای و مورفولوژی) شناسایی شدند. سپس برای بررسی میزان سیتوتوکسیسیتی، روتین و نانوروتین در ٢٤ و ٤٨ ساعت با تست MTT سلولها مورد سنجش قرار گرفت و بررسی میزان بیان ژن های Bax و Bcl2 به روش Real Time RT-PCR انجام شد. جهت آنالیز آماری داده ها از آزمون t-test و ANOVA و توسط نرم افزار SPSS ورژن ١٧ انجام شده و سطح معنی داری p≤0.05 در نظر گرفته شد.
یافته ها: ارزیابی نانوذرات تهیه شده میانگین اندازه ذره ای ٧٥ نانومتر و مورفولوژی کروی را نشان داد. نتایج تست MTT برای بررسی سمیت سلولی روتین نشان داد که روتین در مدت 24 و 48 ساعت در غلظت های مختلف اثر سمی بر روی سلولهای HN5 نداشت ولی نانوروتین در مدت 24 و 48 ساعت در تمام غلظتها اثر سمی بر روی سلولهای HN5 داشته و 50IC آن 30،51 و ٢٧،٣٤ میکرومولار به ترتیب در ٢٤ و ٤٨ ساعت محاسبه شد (p<0.05).
میزان بیان ژن Bcl2 در سلولهای HN5 در مواجهه با نانوروتین، کاهش معنی دار نسبت به گروه کنترل نشان داد (p<0.05). نتیجه آزمایش میزان بیان ژن Bax در سلولهای HN5 در مواجهه با روتین و نانوروتین تغییر معنی داری نشان نداد (p>0.05). نسبت Bax/Bcl-2 در سلولهای HN5 مواجه شده با روتین، تفاوت معنی داری نکرد ولی نانوروتین باعث افزایش نسبت Bax/Bcl-2 شد .(p<0.05)
نتیجه گیری: با توجه به نتایج مکانیسم القا مرگ سلولی نانوروتین، مسیر داخلی آپوپتوز بوده و با توجه به افزایش بیش از 100 برابر سمیت نانوروتین نسبت به روتین روی سلول های سرطان دهان که نشانگر اهمیت افزایش سطح تماس روتین با سلولها و اهمیت کاهش اندازه ذره ای تا ابعاد نانومتری می باشد، به نظر می رسد این ماده بتواند گزینه ای مناسب برای طراحی داروهای ضد سرطانی مخصوصاً در ترکیب با داروهای ضد سرطان شیمیایی باشد.